Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2007, № 2
|
Врачу общей практики
|
Номер 2'2007
|
РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ И МЕСТНОЕ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО IL-1β ЧЕЛОВЕКА ПРИ ПРИМЕНЕНИИ У БОЛЬНЫХ С ДЛИТЕЛЬНО НЕЗАЖИВАЮЩИМИ РАНАМИ И ТРОФИЧЕСКИМИ ЯЗВАМИ
Е.А. Варюшина, В.В. Москаленко, А.С. Симбирцев, Т.П. Лебедева, А.Н. Бубнов
Целью исследования было изучение лечебного эффекта IL-1β при хронических ранах различной этиологии у человека. Рекомбинантный человеческий IL-1β (ГосНИИ ОЧБ, Санкт-Петербург) применяли в составе мазей на гидрофобной основе в концентрациях 0,05-5000 нг/мл у больных с трофическими язвами и длительно незаживающими ранами нижних конечностей на фоне венозной недостаточности или диабета I или II типов. Лечение мазью с IL-1β показало высокую клиническую эффективность во всех группах больных. При клинических исследованиях была выбрана наиболее эффективная концентрация IL-1β в мази - 50 нг/мл. Цитологический анализ мазков-отпечатков из ран при применении IL-1β показал увеличение числа жизнеспособных лейкоцитов и клеток эпителия, а также процента макрофагов и фибробластов. Возрастала спонтанная продукция супероксидных радикалов и фагоцитарная функция нейтрофилов. Механизм действия препарата был аналогичен в группах с разным происхождением хронических ран. Таким образом, IL-1β повышал как репаративные процессы в ранах, так и функции фагоцитов, что способствовало успешному заживлению ран и их быстрому очищению и предохраняло от развития вторичных инфекций. Использование IL-1β является перспективным направлением для лечения хронических ран различного генеза у человека. (Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 2. С. 54-62.)
Заживление кожной раны - динамичный процесс, в который вовлечены клетки крови, внеклеточный матрикс, клетки соединительной ткани и растворимые медиаторы - цитокины и ростовые факторы. Одним из важнейших цитокинов, регулирующих местный воспалительный процесс и заживление ран, является IL-1β. Значительная экспрессия этого медиатора в тканях раны происходит уже через 30-90 минут после нанесения раны, а в раневой жидкости определяются высокие уровни IL-1β и IL-1β, что указывает на активную роль IL-1 в регуляции раневого процесса у человека [3, 11].
Заживление раны проходит три основных фазы - воспаления, регенерации и реорганизации рубца и эпителизации. В любой фазе заживления возможно затяжное течение раневого процесса с вялым ростом грануляций и замедленной эпителизацией. Предпосылкой развития хронического раневого процесса является невозможность завершения острого воспаления полноценной регенерацией по той или иной причине. Основными причинами осложнений заживления ран при хронической венозной недостаточности и при диабете являются ишемия, нейропатия и инфекции. В хронических ранах наблюдаются недостаточность функций макрофагов, снижение продукции ростовых факторов, а также нарушение образования новых сосудов и внеклеточного матрикса [5, 14]. При диабете часто происходит инфицирование ран, так как снижены функции нейтрофилов, играющих основную роль в очищении ран [6]. Широкий спектр биологических активностей IL-1β, вовлеченных в процесс заживления ран, хорошо изучен к настоящему времени в системе in vitro. Обе формы IL-1 - IL-1β и IL-1β обладают ранозаживляющей способностью в экспериментах in vivo [9, 12, 13]. Однако данные, касающиеся использования IL-1 при хронических ранах у человека, до сих пор отсутствуют. Целью данного исследования было углубленное изучение эффектов и возможных механизмов действия мази, содержащей IL-1β, у больных с длительно незаживающими ранами и трофическими язвами.
Материалы и методы
Исследование проведено в рамках клинических испытаний мазевой формы IL-1β (ГосНИИ ОЧБ, Санкт-Петербург) на основании разрешения для клинических испытаний Бюро Фармакологического государственного комитета от 16 июля 1998 г. Мазь содержит рекомбинантный человеческий интерлейкин 1β в концентрации 50 нг/мл. Мазевая основа представляет собой смесь ланолина, вазелинового масла, коэмульгатора и воды. Для сравнительной оценки эффективности были исследованы мази с пятью другими концентрациями IL-1β (0,05-5000 нг/мл). В качестве плацебо у пяти больных использовали мазевую основу без интерлейкина.
Определение эффективности мазей, содержащих IL-1β, проводили у 88 больных с гнойно-некротическими осложнениями нижних конечностей в возрасте от 24 до 86 лет, среди них 27 мужчин и 61 женщина. Лечение проводили стационарно на базах 1-го и 4-го хирургических отделений Центра по лечению хирургических инфекций (городская больница № 5 Санкт-Петербурга) и 1-го и 2-го хирургических отделений Балтийской клинической центральной бассейновой больницы Санкт-Петербурга. Длительность существования ран до начала лечения была свыше 2 недель, а трофических язв - от 1 месяца до 4 лет. Площадь раневой поверхности - от 35 мм2 до 5780 мм2. Контрольную группу составил 21 больной в возрасте от 36 до 64 лет; мужчин - 4, женщин - 17, длительность существования и размеры трофических язв и длительно незаживающих ран были аналогичны таковым в исследованной группе. Изучение применения ИЛ-1b на фоне сахарного диабета 1 и 2 типов проведено у 20 больных с трофическими язвами (длительность существования язв была от 2 до 10 месяцев, площадь ран составляла от 177 мм2 до 4329 мм2) и у 17 пациентов с незаживающими ранами нижних конечностей (длительность раневого процесса была от 2 до 6 недель, а площадь ран - от 177 мм2 до 2827 мм2). Контрольная группа состояла из 7 больных с трофическими язвами и 7 - с длительно незаживающими ранами. В контрольных группах использовали мази на гидрофобной основе "Солкосерил" и "Вульнузан" (СОФАРМА, Фармахим, Болгария).
Мазь, содержащую IL-1β, начинали использовать после очищения раны и перехода воспаления в фазу регенерации. Мазь наносили на марлевую салфетку и накладывали на поверхность раны. Смену повязок производили ежедневно.
Ежедневно во время перевязок проводили оценку состояния раны и раневой области, при этом учитывали интенсивность образования грануляционной ткани, эпителизации и раневой контракции. Измерение площадей ран производили с помощью планиметрического метода Л.Н. Поповой [2]. Измерение выполняли до начала лечения и повторяли несколько ран в динамике лечения. Вычисляли процент уменьшения площади раневой поверхности за сутки.
До начала исследования и на нескольких сроках в процессе лечения мазью делали мазки-отпечатки из разных участков ран по методу Т.М. Покровской [2]. Препараты окрашивали по методу Романовского - Гимза и проводили микроскопическую оценку результатов. При этом учитывали среднее количество клеток и процент сохранных лейкоцитов в поле зрения на не менее чем пяти полях зрения в разных участках препарата (ок. x 16, об. x 40); относительное количество разных типов лейкоцитов и клеток соединительной ткани подсчитывали с использованием масляной иммерсии (ок. x 16, об. x 100). Также учитывали наличие эпителиальных клеток: 0 - эпителий отсутствовал, "+" - единичные клетки в некоторых частях препарата, "++" - отдельные скопления клеток в различных частях препарата, "+++" - пласты эпителиальных клеток в различных частях препарата. Отмечали наличие или отсутствие микробов и их расположение (внеклеточное или внутриклеточное).
Для получения нейтрофилов после предварительного очищения раны производили соскоб ложкой Фолькмана с поверхности раны, полученный клеточный материал ресуспендировали, фильтровали и отмывали центрифугированием. Жизнеспособность полученных нейтрофилов составила 74,30 + 1,35 %.
Бактерицидную функцию нейтрофилов определяли по восстановлению нитросинего тетразолия (НСТ) на стеклах [7]. Определяли спонтанные и индуцированные фоболмиристатацетатом (ФМА, "Sigma", USA; 10 нг/мл) значения. Под микроскопом подсчитывали процент положительных клеток с синими гранулами в цитоплазме, индекс стимуляции высчитывали как отношение значений индуцированного теста к значению спонтанного.
Фагоцитарную функцию нейтрофилов оценивали с использованием опсонизированных дрожжей в качестве объекта фагоцитоза. Нейтрофилы ресуспендировали в концентрации 2,5 x 106 в среде RPMI 1640 ("Sigma", USA), содержащей 10 % телячьей эмбриональной сыворотки ("Sigma", USA), и вносили объект фагоцитоза так, чтобы соотношение нейтрофил/дрожжи равнялось 1:10. Пробы инкубировали в течение 40 мин при 37 °С, а затем осаждали клетки центрифугированием. Из осадка готовили мазки, фиксировали и окрашивали по методу Романовского - Гимза. Результаты реакции оценивали микроскопически, подсчитывали фагоцитарную активность (относительное количество фагоцитировавших дрожжи нейтрофилов) и фагоцитарное число (среднее количество дрожжевых клеток, поглощенное одним фагоцитом).
При статистической обработке полученных результатов производили расчет средней арифметической и ошибки средней (Mean + SEM). Различия между группами оценивали с использованием непараметрического критерия Манна - Уитни.
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2005-2006 годы.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
