197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 234 16 69, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 234 94 89
E-mail:
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2007, № 3

ИНТЕРФЕРОНЫ И ДРУГИЕ ЦИТОКИНЫ ПРИ ОСТРОМ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ С

Ф.И. Ершов, М.В. Мезенцева

В настоящей работе на примере острого вирусного гепатита С (ОВГС) сделана попытка определить закономерности изменений цитокинового профиля у больных. Другой задачей было определение эффективности нового противогепатитного препарата - Аллокина А (ОАО "Аллоферон", Россия). Для этого у 100 больных ОВГС, леченных Аллофероном, и 40 здоровых добровольцев были исследованы интерфероновый статус (биологическим методом) и цитокиновый профиль (методом ОТ-ПЦР). Отмечены нарушения ряда параметров системы интерферона и цитокинов у больных ОВГС до лечения. В результате лечения положительный эффект (снижение активности инфекционного процесса) наблюдался при следующих закономерностях в изменении лабораторных показателей: 1) активации системы IFN и нормализации Т- и В-клеточного иммунитета, 2) нормализации или тенденции к нормализации у больных ОВГС экспрессии генов следующих цитокинов: IFNα (через 10-30 дней наблюдения), IFNγ (через 10-30 дней и до конца срока наблюдения), TNFα и IL-12 (через 10 дней-2 месяца и до конца срока наблюдения), IL-8 и IL-10 на начальном этапе терапии (10-30 дней), 3) нормализации продукции IFNγ на разных этапах его синтеза и, соответственно, восстановлении функциональной активности Т-лимфоцитов, способности к активации иммунной системы и нормализации иммунного ответа по Тh1-типу. (Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 3. С. 32-35.)

Среди вирусных гепатитов доминирующее место занимают инфекции, вызванные вирусами гепатитов В и С (ВГВ и ВГС). С ними связаны практически все летальные исходы у больных острыми вирусными гепатитами (ОВГ), а также развитие хронических заболеваний печени (хронизация при ВГС достигает 80%) с исходом в циррозы и первичный рак печени. Значительно выросли в последнее время показатели заболеваемости ВГВ и ВГС в России, что связано, в первую очередь, с ростом наркомании. По сравнению с 1994 г. (первым годом официальной регистрации ВГС в России), в 2002 г. официальные показатели заболеваемости ВГС в России возросли в 7 раз. Однако истинные масштабы этих инфекций значительно выше, т. к. в ряде случаев они протекают бессимптомно в течение многих лет [6, 11].

В медицинской практике существует пока одна рекомбинантная вакцина - против ВГВ. Большин-ство экспертов считает наиболее целесообразной противовирусную терапию больных острыми ВГВ и ВГС (ОВГВ и ОВГС) с помощью препаратов интерферона альфа (IFNα). В то же время, длительная терапия препаратами IFNα связана с рядом побочных эффектов [1, 2, 3].

Препараты экзогенного IFN могут заменяться в клинической практике использованием его индукторов, вызывающих в организме образование собственного (эндогенного) IFN и обладающих антивирусной, иммуномодулирующей и антитуморогенной активностью [3]. Ряд индукторов IFN (амиксин, циклоферон, ридостин) в настоящее время широко применяется в терапии ОВГС. Исследования показали, что противовирусная активность названных препаратов в целом совпадает с активностью экзогенных IFN [3, 9].

К сожалению, несмотря на достаточно большой набор препаратов, заболеваемость вирусными гепатитами плохо контролируется. Поэтому актуальной задачей остается разработка новых лечебных препаратов, эффективных при острых и хронических вирусных гепатитах В и С.

Известно, что при ВГС, как и при многих других вирусных заболеваниях, развивается дисбаланс в иммунной системе человека. У больных отмечены значительные нарушения систем иммунитета и интерферона. По данным литературы, в ходе первичного обследования больных ВГС отмечена супрессия Th1-лимфоцитов [1, 5].

В настоящей работе на примере острого вирусного гепатита С сделана попытка определить закономерности изменений цитокинового профиля у обследованных больных. Другой задачей проведенных исследований было определение эффективности нового противогепатитного препарата аллокина А (ОАО "Аллоферон", Рос-сия).

Материалы и методы

Обследовано 100 больных в возрасте от 16 до 50 лет с верифицированным диагнозом острый вирусный гепатит С. Диагноз ОВГС подтверждался определением серологических маркеров (анти-HCV IgG, анти-HCV IgM, aнти-core-HCV IgG), а также количественным анализом уровня РНК HCV c помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Контрольную группу составляли 100 здоровых добровольцев в возрасте от 20 до 45 лет. Для определения показателей интерферонового статуса и цитокинового профиля использовали гепаринизированную цельную кровь, полученную асептически из локтевой вены.

Исследование расширенного интерферонового статуса проводили по методике, разработанной в отделе интерферонов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи [4, 7]. Определяли следующие показатели:

• продукцию IFNα, индуцируемую вирусом болезни Ньюкасла (лаборатория препаратов интерферона НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва);
• продукцию IFNγ, индуцируемую стафилококковым энтеротоксином А (НПО "Иммунопрепарат", Уфа, Россия);
• уровень циркулирующего IFN в плазме крови;
• уровень спонтанно продуцируемого IFN;
• чувствительность к препаратам IFNα (с использованием прайминг-эффекта). Пациента считали чувствительным к IFNα, если клетки его крови отвечали увеличением ВБН-индуцируемой продукции IFN при праймировании одним из следующих шести препаратов IFNα: а) человеческим лейкоцитарным IFN и лейкинфероном ("Интекор", Москва, Россия), б) реафероном (НПО "Вектор", Новосибирск, Россия), в) реальдироном ("Биотехна", Литва), г) интроном А ("Шеринг-Плау", США), рофероном А ("Хоффманн-Ля Рош", Швейцария);
• уровень чувствительности к препарату IFNγ - Гаммаферону (НПО "Фермент", Рига, Латвия) (с использованием прайминг-эффекта);
• уровень чувствительности к разрешенным для медицинского применения индукторам IFN: ридостину (НПО "Вектор", Новосибирск, Россия) и циклоферону (НТФФ "Полисан", Санкт-Петербург, Россия), а также к иммуномодулирующему препарату Аллокин (ОАО "Аллоферон", Россия). Пациента считали чувст-вительным к указанным препаратам, если клетки его крови продуцировали IFN при действии этих препаратов;
• IFN-ингибирующая /IFN-стимулирующая способность плазмы или сыворотки крови.

Определение активности IFN

Титрование IFN проводили в 96-луночных плоскодонных планшетах с культурой диплоидных фибробластов человека (получены из музея клеточных культур НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва), выращенных в ростовой среде до образования монослоя. В качестве индикаторного тест-вируса использовали вирус энцефаломиокардита мышей (получен из музея вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва). За единицу активности IFN (ЕД/мл) принимали величину, обратную его максимальному разведению, которая защищала 50 % клеток от цитопатического действия 100 ТЦД50 вируса. В каждом титровании использовался также референс-препарат IFN для перевода полученной активности IFN в международные единицы.

Определение мРНК цитокинов

Определение активности мРНК 11 цитокинов в мононуклеарах периферической крови проводили с использованием методов обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Выделение РНК проводили по методике P. Chomczynsky, N. Sacchi [14] методом кислой экстракции тиоцианатом гуанидина - фенолом - хлороформом. Обратная транскрипция и ПЦР-амплификация были выполнены в соответствии с методикой, предложенной G. Gelder [16]. В работе были использованы пары праймеров для следующих цитокинов: IFNα [16], IL-6, IL-8 [18], IL-1β, IL-2, IL-4, IL-10, TNFα, IFNγ [20], IL-18 [15], IL-12 [17]. В качестве положительного контроля использовали β-актин [18]. Регистрацию результатов ПЦР осуществляли электрофоретически в 2,5%-ном агарозном геле, окрашенном бромистым этидием. Для идентификации нуклеотидных последовательностей использовали маркер для электрофореза фирмы Promega (G 1758).

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2005-2006 годы.