E-mail: [email protected]
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'cytokines.ru', 2002, № 1

ЭРИТРОПОЭТИН КАК МОДУЛЯТОР ЦИТОКИН-СИНТЕЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК ЭРИТРОИДНОГО РЯДА

С.В. Сенников, Т.В. Инжелевская, С.В. Крысов, В.А. Козлов

Ранее было установлено, что клетки эритроидного ряда мышей и человека обладают цитокин-синтезирующей активностью. Известно, что эритропоэтин (ЕРО) является специфическим фактором, регулирующим выживаемость, пролиферацию и дифференцировку клеток эритроидного ряда. Целью работы было исследование влияния ЕРО на цитокин-синтезирующую активность эритроидных ядросодержащих клеток (ЭЯК). В качестве источника ЭЯК использовали клетки костного мозга человека (КМ), клетки селезенки новорожденных и взрослых мышей линии (DBA?C57Bl/6)F1 после введения фенилгидразина. ЭЯК выделяли методами негативной и позитивной селекции. Кондиционную среду от ЭЯК (1?106/мл) получали после 24 ч культивирования с и без ЕРО (5 ед/мл - для мышей и 2 ед/мл - для человека). Определение количественного содержания цитокинов производили электрохемилюминесцентным методом. Показано, что ЭЯК, выделенные из селезенок как новорожденных мышей, так и взрослых мышей после воздействия фенилгидразина при культивировании с ЕРО продуцировали достоверно меньше GM-CSF и IFNg, чем ЭЯК, которые культивировали без ЕРО. Значимое влияние ЕРО оказывал только на менее зрелые клетки КМ человека, а именно на АГ-ЭБ+ ЭЯК, вызывая достоверное снижение продукции ими IL-2 и IFNg. Таким образом, ЕРО является модулятором цитокин-синтезирующей активности ЭЯК. ЕРО приводит к снижению продукции ЭЯК цитокинов, оказывающих ингибирующее действие на пролиферативную активность эритроидных клеток.

Ключевые слова: эритропоэтин, эритроидные клетки, цитокины.

Установлено, что эритроидные ядросодержащие клетки (ЭЯК) обладают цитокин-синтезирующей активностью. Продемонстрирована способность ЭЯК новорожденных мышей и мышей с фенилгидразин-индуцированной анемией продуцировать IFNg и GM-CSF [11]. Способность к продукции ряда цитокинов, таких как: IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNFa, IFNg и TGFb1 - показана также для эритроидных клеток фетальной печени [12, 13] и костного мозга (КМ) человека [2]. Цитокины - это, в основном, индуцибельные белки, многие из которых могут влиять на цитокин-синтезирующую активность клеток различных ростков кроветворения. Известно, что эритропоэтин (ЕРО) является специфическим фактором, регулирующим выживаемость, пролиферацию и дифференцировку клеток эритроидного ряда. Под влиянием ЕРО в эритроидных клетках наблюдается повышение синтеза РНК и ДНК [5]. Целью данной работы было исследование влияния ЕРО на цитокин-синтезирующую активность ЭЯК.

Материалы и методы

В качестве источника ЭЯК использовали клетки КМ человека, клетки селезенки новорожденных и взрослых мышей линии (DBA?C57Bl/6)F1 после введения фенилгидразина.

Гемолитическую анемию у мышей вызывали введением фенилгидразина (Fisher Sci. Co.) внутрибрюшинно по схеме: первый день - по 1,2 мг на мышь в 17 ч, второй день - по 0,6 мг на мышь в 9 и 17 ч. Селезенки забирали на 4-й день [11, 2]. Селезенки новорожденных забирали в период активного эритропоэза на 0-3 сут. постнатального периода.

Метод выделения ЭЯК КМ человека и получение кондиционной среды от ЭЯК

Клетки КМ, полученные при проведении стернальной пункции, наносили на раствор фиколл-верографина (1,082 г/см3) и центрифугировали 30 мин при 1200 об/мин. Клетки, составляющие интерфазное кольцо, собирали, трижды отмывали в среде RPMI-1640 с 1% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС). Суспензию освобождали от адгезирующих элементов в чашке Петри [1]. Полученную суспензию клеток инкубировали в течение 30-40 мин с человеческой сывороткой IV группы крови. По окончании инкубации клетки два раза отмывали.

Получение обогащенной популяции ЭЯК

Клетки, освобожденные от адгезивных элементов, инкубировали в концентрации 1?107/мл в бессывороточной среде RPMI-1640 с L-лейцилметиловым эфиром (L-ЛМЭ,15 мМ) 30 мин при 37 °С для освобождения от клеток с хорошо выраженным лизосомальным аппаратом [14]. По окончании инкубации клетки два раза отмывали.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!

Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2002 и 2003 годы!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск cytokines.ru, 2008 год.