197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 234 16 69, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 234 94 89
E-mail: [email protected]
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'cytokines.ru', 2002, № 1

АЛЛЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ IL-4, IL-10 И TNFA ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

М.В. Смольникова, В.Ф. Прокофьев, Л.П. Сизякина, А.Б. Шемшура, И.А. Ольховский, В.И.Коненков

Изучено распределение аллельных вариантов промоторных участков генов IL-4 (C-590T), IL-10 (C-597A), TNFa (G-308A) у ВИЧ-инфицированных пациентов и практически здоровых лиц европеоидного населения России. Методом рестриктного анализа продуктов амплификации выявлены существенные отклонения в распределении генотипов исследованных полиморфизмов у ВИЧ-пациентов по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе. Описаны различия между мужчинами и женщинами в распределении генотипов, играющие существенную роль в характере наследования аллельных вариантов генов цитокинов. Изучены ассоциации сочетаний аллелей цитокинов и их генотипов с темпом прогрессирования инфекции при СПИДе. Предполагается, что влияние иммуногенетических факторов на процесс инфицирования может быть связано с различиями в первичной структуре полиморфных промоторных участков генов цитокинов, от которых зависит уровень продукции цитокинов клетками иммунной системы.

У ВИЧ-инфицированных людей наблюдается дисрегуляция иммунной системы, при которой происходят повреждение Т-клеточного звена и сравнительно менее выраженное изменение функционирования В-клеточного звена [4,5,18], отмечаются характерные нарушения содержания цитокинов и функционирования цитокиновой сети [20]. По ряду особенностей развития ВИЧ-инфекции, изменению количественных и функциональных показателей иммунной системы, характеру клинической картины заболевания различают медленно прогрессирующий (содержание CD4 выше 400?106/л в течение 6 лет и более) и быстро прогрессирующий (содержание CD4 менее 200?106/л в течение 5 лет) варианты течения [17]. При увеличении продукции интерлейкина 4 (IL-4) и интерлейкина 10 (IL-10) и одновременно сниженном синтезе интерлейкина 2 предполагают, что существенный вклад в прогрессирование СПИДа вносит дисбаланс цитокинов, обусловленный переключением Th1-доминантного профиля цитокинов на Th2-доминантный [18]. Фактор некроза опухоли-альфа (TNFa) играет особую роль в патогенезе СПИДа, вызывая репликацию вируса иммунодефицита человека и горизонтальное распространение инфекции [6]. Описано in vitro воздействие IL-4 и IL-10 на репликацию ВИЧ. IL-10, наряду с IL-12, считают главным иммунорегуляторным цитокином, контролирующим прогрессирование ВИЧ-инфекции [18].

Описан аллельный полиморфизм генов многих цитокинов, отмечено влияние аллельных вариантов генов на свойства и функционирование белковых продуктов этих генов [7,11]. Отдельные аллельные варианты генов цитокинов ассоциированы с восприимчивостью к аутоиммунным, аллергическим и инфекционным заболеваниям, особенностями и тяжестью их течения, а также с повышенным или, напротив, пониженным содержанием продуцируемых цитокинов [8, 13, 19, 21, 22]. Так, наличие варианта -308А в промоторе гена TNFa ассоциировано с его повышенной продукцией клетками иммунной системы [15], а для гена IL-4 описана корреляция -590Т аллеля с повышенной продукцией этого интерлейкина и быстрым прогрессированием ВИЧ-инфекции [20].

Целью настоящего исследования явилось изучение распределения аллельных вариантов генов IL-4, IL-10, TNFa у ВИЧ-инфицированных пациентов, а также анализ возможных ассоциаций определенных генотипов этих цитокинов с вариантами течения и прогрессирования ВИЧ-инфекции.

Материалы и методы

Обследована группа из 120 ВИЧ-инфицированных больных (35 женщин и 85 мужчин) в возрасте от 16 лет до 51 года, а также группа из 52 практически здоровых лиц (25 женщин и 27 мужчин). В обеих группах были представители фенотипически европеоидного населения России.

Высокомолекулярные геномные ДНК выделяли из клеток периферической крови по стандартной методике [12]. Амплификацию участка ДНК, содержащего указанный полиморфизм, осуществляли с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием последовательностей праймеров (НПО "Вектор") и соответствующих параметров температурных циклов (табл. 1). Реакцию проводили в 20 мкл стандартной реакционной смеси с использованием Taq-ДНК-полимеразы ("Сибэнзим", г. Новосибирск). В качестве маркера размера ДНК использовали плазмиду pUC19, расщепленную рестриктазой MspI ("Сибэнзим"). Полиморфизм С-590Т IL-4 типировали с помощью рестриктазы Bsm FI (New England Biolabs Inc, USA), полиморфизм A-597C IL-10 - с помощью Rsa I ("Сибэнзим"), полиморфизм A-308G TNFa - с помощью Bsp 19I ("Сибэнзим"). Рестрикцию продукта амплификации гена IL-4 проводили в течение 6 ч при 65 °С, рестрикцию продуктов IL-10 и TNFa проводили в течение 10-12 ч при 37 °С. Продукты рестрикции разделяли с помощью электрофореза в 2 %-ном агарозном геле, окрашивали бромистым этидием и визуализировали в УФ-свете. Длина ПЦР-продукта гена IL-4 составила 252 пн для варианта Т, длина двух продуктов расщепления Bsm FI в присутствии варианта С - 192 и 60 пн соответственно. Длина ПЦР-продукта гена IL-10 составила 580 пн, длина продуктов расщепления Rsa I в присутствии варианта А - 240, 232, 66 и 42 пн, в присутствии варианта С - 306, 232 и 42 пн. Длина ПЦР-продукта гена TNFa составила 117 пн для варианта A, длина двух продуктов расщепления Bsp 19I в присутствии варианта G - 97 и 20 пн соответственно.

Статистическую обработку результатов осуществляли с использованием показателей относительного риска (RR) - по Woоlf [2], прогностического коэффициента (ПК) - по Гублеру [1], достоверности (р) - по точному методу Фишера [3].

Результаты и обсуждение

У ВИЧ-инфицированных больных нами найден ряд различий с контрольной группой здоровых людей в частоте сочетаний аллельных вариантов генов цитокинов, связанных с появлением A/A гомозиготного варианта гена IL-10 (RR = 2,36), не выявленного у здоровых лиц, и отсутствием гомозиготного A/A варианта гена TNFa (RR = -12,25), обнаруженного у 4 % здоровых женщин. Среди ВИЧ-инфицированных пациентов T/T генотип гена IL-4 встречается почти в четыре раза чаще, чем среди доноров, частота A/G варианта гена TNFa также в четыре раза выше у больных (RR = 4,67) за счет снижения частоты обоих гомозиготных вариантов (табл. 2).

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!

Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2002 и 2003 годы!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "cytokines.ru" он-лайн!


Обновление на книжной полке: компакт-диск cytokines.ru, 2006 год.


Обновление на книжной полке: компакт-диск cytokines.ru, 2007 год.