Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2003, № 2
|
Оригинальные статьи
|
Номер 2'2003
|
СЫВОРОТОЧНЫЙ УРОВЕНЬ РАСТВОРИМЫХ МОЛЕКУЛ МЕЖКЛЕТОЧНОЙ АДГЕЗИИ ПРИ УРОГЕНИТАЛЬНОМ ХЛАМИДИОЗЕ
Н.И. Егорова, Г.Ю. Курников, А.А. Бабаев, В.В. Новиков
C помощью иммуноферментного метода определяли уровень растворимых форм (s-форм) мембранных антигенов ICAM-1 (CD54), ICAM-3 (CD50), CD18, CD38, а также димерные формы растворимых ICAM-1 и CD38 антигенов в сыворотке крови больных урогенитальным хламидиозом (УГХ). Показано, что достоверное повышение при УГХ содержания растворимых молекул адгезии CD50 и CD54, а также их растворимого лиганда - CD18 антигена (b2-субъединицы интегринов) сопровождалось признаками дисбаланса в их содержании. Обнаружено увеличение сывороточной концентрации sCD38 антигена у больных УГХ, однако статистически значимым оказалось изменение только димерной фракции данного белка. Полученные результаты позволяют говорить о возможном влиянии растворимых антигенов адгезии ICAM-1, ICAM-3, CD18 и растворимого CD38 антигена на иммунопатогенетические механизмы развития хламидийной инфекции.
В последние годы среди множества воспалительных заболеваний урогенитального тракта все большее распространение получает хламидийная инфекция. Возбудители хламидиоза - облигатные внутриклеточные паразиты - не относятся к патогенам, представляющим особую опасность, но на фоне ухудшения экологической ситуации снижение иммунитета приводит к латентным и персистирующим формам инфекций, вызывая поражение различных систем и органов. В частности, они являются причиной негонококковых урогенитальных инфекций, приводящих к внутриутробному инфицированию плода, невынашиванию беременности, бесплодию, что в целом имеет неблагоприятные последствия для репродуктивного здоровья населения.
Иммунологические изменения, выявленные различными авторами при урогенитальном хламидиозе (УГХ), характеризуются вариабельностью и неоднозначностью. Так, по результатам многих исследований, анализ факторов иммунологической защиты при хронической хламидийной инфекции свидетельствует об угнетении всех звеньев иммунитета [3]. Нарушения в системе иммунореактивности, затрагивающие клеточный иммунитет, проявляются в уменьшении общего количества Т-лимфоцитов (CD3+), CD4+ Т- лимфоцитов и HLA-DR+-лимфоцитов, а также в снижении иммунорегуляторного индекса (соотношения CD4+/CD8+ клеток), что способствует длительной персистенции возбудителя в организме [4].
В основе иммунного ответа лежат межклеточные и межмолекулярные взаимодействия, важную роль в реализации которых играют мембранные белки клеток иммунной системы. Известно, что мембранные белки могут иметь растворимые аналоги (так называемые s-формы), образующиеся за счет шеддинга или альтернативного сплайсинга матричной РНК. Растворимые формы мембранных антигенов представляют собой новый класс иммунорегуляторных молекул, которые участвуют в передаче сигнала клетке или, наоборот, выполняют функции ограничителей иммунных реакций. В настоящее время насчитывается более 260 дифференцировочных антигенов системы гемопоэза, однако информация о количественном содержании растворимых форм мембранных антигенов в сыворотке крови и их функциональной роли в норме и при патологии, в том числе и при бактериальных воспалительных инфекциях, получена лишь для немногих из них. Тем не менее исследования, проведенные в различных лабораториях, выявили, что ряд дифференцировочных антигенов гемопоэтических клеток могут обнаруживаться в значительных количествах в сыворотке крови и выполнять роль диагностических и прогностических маркеров при ряде заболеваниий. Изменение концентрации s-форм дифференцировочных антигенов в биологических жидкостях может вызывать множественные эффекты, отражающие патогенетические механизмы, с одной стороны, и вносящие свой вклад в нарушение гомеостаза при различных заболеваниях, с другой стороны [5].
Целью настоящего исследования явилась оценка при урогенитальном хламидиозе сывороточных уровней растворимых форм мембранных антигенов, принадлежащих к функциональной группе молекул межклеточной адгезии.
Материалы и методы
В работе использованы образцы сыворотки крови 32 больных урогенитальным хламидиозом, положительные в реакции прямой иммунофлуоресценции. Образцы были получены из Сормовского кожно-венерологического диспансера Нижнего Новгорода. Контрольную группу составили образцы сыворотки крови 80 здоровых доноров, сопоставимых по возрасту и полу с больными УГХ.
Краткая характеристика антигенов адгезии, сывороточная концентрация которых оценивались в настоящей работе, представлена в таблице.
Содержание в сыворотке крови антигенов sCD50, sCD54 и его димера (sCD54-димер), sCD18, sCD38 антигена и его димерной фракции (sCD38-димер) определяли с помощью твердофазного иммуноферментного метода с применением моноклональных антител (МКА) серии ИКО (ИКО-60,
ИКО-184, ИКО-108, ИКО-20 соответственно) [2] и поликлональных антител, направленных против поверхностных антигенов мононуклеарных клеток периферической крови человека.
На первом этапе при определении антигенов sCD50, sCD38, sCD18, sCD54 поликлональные козьи антитела, очищенные сульфатом аммония и риванолом, в объеме 100 мкл сорбировали в лунках планшетов для иммуноферментного анализа в течение 16-18 ч при 25 °С. При определении олигомерных форм антигенов sCD38, sCD54 в лунки планшетов аналогично вносили по 100 мкл рабочего раствора моноклональных антител ИКО-20 или ИКО-184 соответственно с последующей инкубацией планшетов в тех же условиях. Несвязавшиеся антитела пятикратно отмывали фосфатно-солевым раствором (ФСР-Т), содержащим 0,9 % NaCl, 0,1 % Na2HPO4 и 0,1 % твина-80.
Затем в лунки планшетов вносили исследуемые образцы сыворотки крови с последующей инкубацией планшетов в течение 16-18 ч при 25 °С во влажной камере. После этого планшеты отмывали ФСР-Т, как указано выше. При определении уровня антигена sCD38 и его димера перед внесением исследуемой сыворотки во все лунки добавляли по 100 мкл блокирующего раствора (3 %-ный раствор ферментативного пептона) и инкубировали планшеты 2 ч во влажной камере при комнатной температуре. Затем планшеты промывали 5 раз раствором ФСР-Т.
После инкубации планшетов с образцами исследуемой сыворотки в лунки добавляли по 100 мкл рабочего раствора моноклональных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена, и инкубировали 1 ч при 37 °C . После отмывания несвязавшегося конъюгата реакцию проявляли раствором 0,1 %-ного ортофенилендиамина в 0,05 М цитратном буферном растворе, рН 5,0, содержащем 0,01 % перекиси водорода. Реакцию останавливали 5 %-ным раствором H2SO4. Учет результатов проводили спектрофотометрически при длине волны 492 нм с использованием фотометра АИФ-М/340. Сывороточные уровни растворимых антигенов оценивали, переводя единицы оптической плотности в условные единицы (ЕД/мл), используя раститровку положительной контрольной сыворотки. Статистическую обработку результатов проводили с использованием t-критерия Стъюдента.
Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2002 и 2003 годы!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
