Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2004, № 1
|
Оригинальные статьи
|
Номер 1'2004
|
ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ РОНКОЛЕЙКИНА В КАРДИОХИРУРГИИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННОГО ЭНДОКАРДИТА
М.А. Алиев, Н.Н. Беляев, К.Б. Абзалиев, Н.С. Сериков, А.Ю. Богданов, Ф.Г. Саввулиди, Р.Т. Тлеулиева
Инфекционный эндокардит (ИЭ) - фатальное заболевание, общая смертность при котором приближается к 100 %. Цель работы - оценить клинические и иммунологические показатели у больных ИЭ при сочетании хирургической операции на клапанах сердца и внутривенных инфузий российского препарата Ронколейкин (человеческий рекомбинантный IL-2). Оценивали выживаемость больных, а также активность стимулированных митогенами КонА и ЛПС Т- и В-клеток в реакции бластной трансформации (МТТ-тест), продукцию IL-2 КонА-индуцированными Т-клетками (ИФА) и продукцию IL-1 ЛПС-индуцированными моноцитами периферической крови (биологическое тестирование). До начала лечения у больных отмечалась тенденция к повышению активности Т- и В-клеток, повышенная способность к продукции IL-2 Т-клетками и сниженная продукция IL-1 ЛПС-индуцированными моноцитами по сравнению со здоровыми донорами. Применение Ронколейкина в качестве иммуномодулятора при хирургическом лечении ИЭ обеспечило ускорение послеоперационного восстановления, снижение летальности (до 6,7 %) и нормализацию иммунологических показателей. (Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, № 1. С. 28-31.)
Ключевые слова: инфекционный эндокардит, Ронколейкин, терапия, иммунитет.
Инфекционный эндокардит (ИЭ) - фатальное заболевание, общая смертность при котором приближается к 100 %, несмотря на применение мощной антибиотикотерапии [4]. При этом гематогенная инфекция приводит к повреждению внутренней оболочки сердца (в основном клапанов сердца, предклапанного аппарата, подлежащих мышечно-фиброзных структур сердца) с остро возникшим пороком сердца с декомпенсацией кровообращения. С целью восстановления сердечной функции в НЦ хирургии им. А.Н. Сызганова используют хирургические методы лечения ИЭ, включая вживление искусственных клапанов сердца. Однако смертность при этом остается достаточно высокой (23,9 %). При лечении гнойно-септических заболеваний ятрогенного происхождения отмечена высокая эффективность применения российского иммуномодулирующего препарата Ронколейкин [3, 5, 8], в том числе у кардиохирургических больных [1]. На основании этого в НЦ хирургии им. А.Н. Сызганова в Алматы были проведены клинические испытания Ронколейкина при хирургическом лечении больных ИЭ. Ронколейкин использовали в качестве вспомогательного терапевтического средства. Целью работы явилось изучение клинического эффекта Ронколейкина, а также оценка некоторых иммунологических показателей в ходе комплексного лечения ИЭ.
Материалы и методы
Характеристика и схема лечения больных. Ронколейкинотерапию проводили 15 больным с ИЭ в возрасте от 8 до 59 лет, поступившим в НЦ хирургии им. А.Н. Сызганова по поводу хирургического лечения клапанных пороков сердца. Все больные длительное время (от 5 до 25 лет) имели в анамнезе ревматизм с наслоением инфекционного процесса на уже существующие пороки сердца (изолированные поражения аортального, митрального, трикуспидального клапанов и их сочетания). До поступления в клинику больные получали максимальную антибиотикотерапию от 1 мес. до 2 лет. Однако в четырех случаях операции были произведены на фоне бактериемии в связи с неэффективностью антибактериальной терапии и прогрессирующей сердечной недостаточностью.
Всем больным было выполнено протезирование клапанов с использованием нового способа профилактики раннего рецидива, заключающегося в местном введении антибиотика Максипин в область фиброзного кольца после протезирования. Ронколейкин больные получали инфузионно, капельно в 400 мл физиологического раствора по следующей схеме. За день до операции вводили Ронколейкин в дозе 1 млн МЕ, затем повторяли введение в той же дозе через 2 дня после операции и еще через 2 дня вводили 500 тыс. МЕ.
Оценку иммунологических функций проводили рандомизированно у 10 больных перед введением Ронколейкина и спустя 7-14 дней после последнего введения в стадии клинического улучшения. В качестве контроля использовали кровь шести здоровых доноров, полученную в Республиканском Центре крови (Алматы).
Оценка иммунологических показателей. О состоянии иммунной системы судили по активности клеток периферической крови в нагрузочных тестах клеточных культур in vitro. Активность Т- и В-клеток периферической крови определяли в реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) с использованием МТТ-теста. Для этого мононуклеарную фракцию выделяли из гепаринизированной крови на градиенте плотности перколла (1,076 г/мл) (Pharmacia, Switzerland). Затем моноциты отделяли от лимфоцитов путем адгезии, инкубируя отмытую суспензию мононуклеаров (5_105 кл/мл) в среде RPMI 1640 с добавлением стандартных антибиотиков и 10%-ной фетальной телячьей сыворотки (HighClone Laboratories Inc., USA) в 24-луночных планшетах (Flow Lab., UK) в течение 3 ч при 37 оС в СО2-инкубаторе. Для оценки митоген-индуцированной (пролиферативной) активности неприлипшие клетки в концентрации 2_105 кл/мл культивировали в 96-луночных планшетах (Flow Lab., UK) при тех же условиях в присутствии либо Т-клеточного митогена конканавалина А (КонА, 5 мкг/мл; Pharmacia, Switzerland), либо В-клеточного митогена ЛПС S. typhimurium (CalBiochem Hoechst, Germany) в течение 72 ч. За 4 ч до окончания срока в лунки вносили препарат МТТ [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид] (Sigma, USA) в конечной концентрации 250 мкг/мл. После этого культуральную среду из лунок удаляли, добавляли по 100 мкл диметилсульфоксида (ДМСО; Sigma, USA) для растворения кристаллов восстановленного формазана и измеряли экстинкцию на иммуноферментном анализаторе StatFax-2100 (Awareness Technology Inc., USA) при l = 492/630 нм. Индекс митоген-индуцированной активности клеток вычисляли по формуле: [(О - К)/К]_100 %, где О - среднее значение экстинкции из 3-4 повторов в опыте (в присутствии митогена), К - то же самое в контроле (в отсутствие митогена).
Часть лунок с КонА-активированными лимфоцитами без МТТ использовали для оценки продукции IL-2. Для этого супернатанты 72-часовых клеточных культур (не менее 3 лунок) объединяли и исследовали в двух повторах на присутствие IL-2 с помощью ИФА, используя коммерческую тест-систему ("Протеиновый Контур", С.-Петербург).
Об активности моноцитов судили по продукции IL-1 прилипающей фракцией мононуклеарных клеток периферической крови. К прилипшим клеткам, полученным, как описано выше, добавляли по 0,5 мл полной культуральной среды, содержащей 25 мкг/мл ЛПС, и культивировали 72 ч в стандартных условиях. Затем бесклеточные супернатанты тестировали на наличие IL-1 в биологическом тесте костимуляции тимоцитов 3-недельных мышей [2]. Для этого тимоциты выделяли из тимуса мышей с помощью стеклянного гомогенизатора, вносили в 96-луночные планшеты в концентрации 106 клеток в 100 мкл среды и культивировали 72 ч в присутствии 2 мкг/мл КонА. За 4 ч до окончания инкубации в лунки вносили МТТ. Далее осуществляли процедуры, как при оценке пролиферативной активности клеток.
Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Excel на персональном компьютере, используя стандарные функции, включая среднюю арифметическую и среднюю квадратическую ошибку средней арифметической. Достоверность различия между вариационными рядами определяли, используя статистическую функцию ТТЕСТ.
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Начата подписка на 2018 год!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
