Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 234 16 69, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 234 94 89
E-mail:
Web: cytokines.ru


  


2008 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:


https://pornoseksxxx.com/

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2004, № 2

Подписаться на 2009 год

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 2'2004

ОСОБЕННОСТИ АКТИВАЦИОННОГО ПОТЕНЦИАЛА ЯДЕР НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ

И.В. Нестерова, А.А. Евглевский, Е.В. Фомичева, В.В. Парфенов

Изучали особенности активации ядер нейтрофильных гранулоцитов (НГ) периферической крови здоровых людей в покое и после активации бактериальным антигеном, а также степень активации ядер нейтрофилов у пациентов с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в процессе хирургического лечения. Активность хроматина ядер НГ тестировали методом поляризационной микроскопии после окраски клеток толуидиновым синим (рН 5,0). У здоровых лиц контрольной группы степень активации ядер НГ зависела от дозы бактериального антигена: чем выше была его концентрация, тем более выраженной была степень активации ядер. У больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, осложненной стенозом, наблюдалась активация хроматина ядер НГ; степень активации возрастала под влиянием операционного стресса и затем постепенно возвращалась к предоперационному уровню, однако не достигала контрольных параметров. (Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, № 2. С. 52-55.)

Ядерный хроматин нейтрофильных гранулоцитов (НГ), как и других клеток, в процессе функционирования способен к сложным конформационным превращениям, изменяющим его физико-химические свойства. Биологическим следствием этих превращений является активация хроматина. Физико-химические свойства хроматина НГ могут быть тестированы методом поляризационной микроскопии, проведенной после окраски ядер клеток толуидиновым синим (рН 5,0), при которой хроматин обнаруживает эффект двулучепреломления - анизотропию [1, 2, 7, 12]. Величина анизотропии отражает структурную упорядоченность хроматина, который является основным носителем генетической информации в клетке. Снижение уровня анизотропии может интерпретироваться как показатель, свидетельствующий о явлениях деспирализации хроматина, сопровождающихся ослаблением химических связей комплекса ДНК - гистон в ядрах клеток. Подобные явления указывают на биологическую активацию хроматина, что является предпосылкой для появления матричной активности ДНК [8] и, возможно, последующего белкового синтеза.

Ранее считалось, что зрелые НГ, ввиду слабого развития белоксинтезирующего аппарата, не обладают способностью к синтезу белка de novo. Однако в настоящее время доказано сохранение у нейтрофилов белоксинтезирующего потенциала, что было документировано результатами опытов с мечеными аминокислотами и основаниями РНК. По современным представлениям, синтезированные de novo белки нейтрофилов являются информационно-регуляторными молекулами и элементами цитоскелета клетки, которые необходимы нейтрофилам в период их функциональной активации, а также имеют отношение к регуляции апоптоза [4, 5, 10, 11].

Целью данного исследования являлось определение особенностей активации ядер нейтрофильных гранулоцитов периферической крови здоровых людей в норме и в условиях дополнительной активации клеток агентами бактериальной природы (стафилококковый энтеротоксин А, культура S. аureus), а также оценка степени активации ядер нейтрофилов у пациентов с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБ ДПК) в процессе хирургического лечения.

Материалы и методы

Объектом исследования являлась венозная кровь 23 условно здоровых добровольцев обоего пола в возрасте от 21 до 49 лет, а также 54 больных того же возраста, страдающих ЯБ ДПК. В две лунки планшета для иммунологических исследований помещали по 100 мкл крови, стабилизированной ЭДТА (0,5 мл 2,5%-ного раствора на 9,5 мл крови). В одну лунку добавляли 100 мкл физиологического раствора (спонтанная активность клеток), в другую - 100 мкл бактериальной взвеси S. aureus в концентрации 1 _ 106 микробных тел в 1 мл физиологического раствора или стафилококковый энтеротоксин А (стимулированная активность клеток). В одной из серий исследований взвесь S. аureus дополнительно разводили в соотношении 1 : 10. Инкубацию проводили в термостате при температуре 37 °С в течение 1 ч. После инкубации готовили препарат-каплю на хорошо обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивали на воздухе, фиксировали смесью этанола и ацетона (1 : 1) в течение 20 мин, подвергали гидролизу в 5 N HCl при температуре 20 °С в течение 30 мин, проводили блокаду альдегидных групп раствором гидроксиламина по Р. Лилли [3] при температуре 37 °С в течение 3 ч. Мазки окрашивали толуидиновым синим (Merck, Germany) в концентрации 0,05 % на 0,001 М цитратном буфере (рН 5,0; 20 мин). Препараты отмывали цитратным буфером, высушивали и исследовали с помощью поляризационного микроскопа "МП-8" (объектив ПЛАН-АПО-МИ 100 _ 1,25; окуляр К10_) при скрещенном анализаторе и поляризаторе.

Для учета интенсивности анизотропного эффекта в НГ использовали модификацию полуколичественного метода Астальди и Верга, адаптированного для изучения ядер [9]. Все ядра были разделены по степени анизотропии на 5 групп, каждой из которых была присвоена определенная величина анизотропии (0 - полное отсутствие; 4 - анизотропно все ядро; рисунок). В дальнейшем расчет анизотропии проводился по формуле

где СЦИ - средний цитохимический индекс, соответствующий величине анизотропии;

a, b, c, d, e - количество клеток с разной величиной анизотропии;

0, 1, 2, 3, 4 - условная степень анизотропии.

Учитывая наличие обратной связи между степенью анизотропии хроматина и его биологической активностью, нами был введен показатель активности нейтрофильных гранулоцитов (ПАН), который рассчитывается по формуле

ПАН = 4 - Х,

где 4 - максимально возможный СЦИ, а Х - СЦИ, подсчитанный в конкретном мазке крови. Таким образом, чем выше анизотропия хроматина (СЦИ  =  Х), тем ниже активность ядра.

Cтатистическую обработку полученных данных производили на компьютере IBMPC/AT с расчетом средних арифметических величин (М), их ошибок (+m), критерия достоверности Стъюдента (t, p) и коэффициента корреляции (r) [6].

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.


© 2002-2009 Цитокины и Воспаление