Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 234 16 69, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 234 94 89
E-mail:
Web: cytokines.ru


  


2008 год
1 номер 2 номер
3 номер 4 номер

О Журнале

Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:


https://pornoseksxxx.com/

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2004, № 3

Подписаться на 2009 год

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 3'2004

ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИЙ АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ TH2-ТИП ПРОТИВОВИРУСНОГО ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА У ДЕТЕЙ С РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

В.З. Кривицкая, А.А. Соминина, В.Ф. Суховецкая, К.К. Милькинт, М.В. Сверлова

Цель исследования - выявление роли респираторно-синцитиального вируса (РСВ) в формировании иммунопатологических аллергических состояний, характеризующихся развитием обструкции верхних и нижних отделов дыхательного тракта. Изменение содержания класс-специфических (IgG, IgA, IgE) и субкласс-специфических (IgG1, 2, 3, 4) антител (АТ) к РСВ определяли с помощью ИФА в сыворотках крови 107 детей с РСВ-инфекцией (РСВИ), протекающей без осложнений, осложненной стенозом гортани (СГ) или острым обструктивным бронхитом (ООБ). Диагностирование РСВИ проводили методами выделения вируса в клеточных культурах, иммунофлуоресценции РСВ-антигенов в клинических материалах, выявления сероконверсий в РСК. Установлены достоверные прямые корреляции между развитием обструкции верхних или нижних отделов дыхательного тракта и высоким содержанием вирусспецифических антител классов IgE и IgA в сыворотках крови детей, перенесших РСВИ, в отличие от IgG4, где зависимость носила обратно пропорциональный характер. Предполагается, что IgG4 могут обладать антиконстрикторным эффектом, компенсируя сенсибилизирующее действие IgE при СГ, но не при ООБ. Установлено, что степень аллергизации к РСВ, показателем которой является высокий уровень анти-РСВ IgE и IgA в крови, увеличивается с возрастом, вероятно, в связи с увеличением числа повторных эпизодов инфекции. У детей с осложненным течением РСВИ на фоне выраженных иммунопатологических реакций понижено содержание противовирусных АТ субклассов IgG, обладающих вируснейтрализующим действием (IgG2, IgG3), что может способствовать остроте заболевания, формированию обструкции и замедленному клиренсу РСВ. (Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, № 3. С. 34-40.)

Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) является распространенной причиной острых респираторных заболеваний (ОРЗ) у детей, сопровождающихся у части пациентов осложнениями в виде бронхитов, бронхиолитов или пневмоний. Тяжелое течение РСВ-инфекции (РСВИ) связано с длительно сохраняющимися изменениями дыхательных функций и легочной гиперреактивностью. При этом возникает риск развития хронических обструктивных заболеваний и отдаленных последствий в виде бронхиальной астмы (БА), а также сенсибилизации к бытовым аллергенам [7, 14]. Причины осложненного течения РСВИ до конца не выяснены. Однако появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что ключевую роль в этих процессах играют иммунопатологические реакции, в том числе искажение баланса регуляторных механизмов [7].

По современным представлениям, характер иммунного ответа, в том числе при вирусных инфекциях, во многом зависит от типа цитокинной регуляции, обусловленной различными клетками, в том числе клонами СD4+ Т-клеток-хелперов (Th). Т-клетки 1-го типа (Th1) экспрессируют интерферон-гамма и IL-2, стимулируют клеточно-опосредованный иммунитет и синтез антител (АТ) субклассов IgG1, IgG2 и IgG3. Т-клетки 2-го типа (Th2) продуцируют IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, обуславливают аллергический ответ, регулируют синтез АТ классов IgE, IgG4 и IgA [10, 15].

Показано, что при первичной РСВИ у младенцев и экспериментальных животных индуцируется Th1-, а при осложненном течении (астма и бронхиолит) - преимущественно иммунопатологический Th2-опосредованный тип иммунного ответа [9].

Причины формирования РСВ-опосредованных аллергических проявлений, выраженных в виде обструкции дыхательных путей, до конца не выяснены. Th2-тип иммунного ответа, в том числе синтез вирусспецифичных АТ класса IgE, может быть одной из них, поскольку в ряде исследований была показана связь между синтезом этого иммуноглобулина и развитием бронхообструкции при тяжелом течении РСВИ у младенцев с бронхиолитами [3, 18].

В свете этих данных правомерным становится вопрос о значимости АТ, синтез которых обусловлен Th2-типом регуляции, т. е. IgE, IgG4, IgA, при осложненном течении РСВИ и формировании обструкции дыхательного тракта.

Биологическая роль вирусспецифичных Th2-зависимых АТ практически не изучена. Однако, поскольку во многих лабораториях ведутся интенсивные исследования патофизиологии аллергических заболеваний, в том числе обструктивных, при которых АТ этого типа играют ключевую роль, получены некоторые представления о механизмах действия АТ этого типа, специфичных к вдыхаемым аллергенам.

Так, например, известно, что взаимодействие мультивалентного аллергена с Fab-фрагментами двух молекул IgE, связанных с Fce-рецепторами (FceRI) на поверхности тучной клетки, вызывает ее активацию и выброс растворимых факторов (гистамина, лейкотриенов), индуцирующих обструкцию дыхательных путей. РСВ-индуцируемый бронхоспазм, возможно, формируется подобным образом, поскольку РСВ может способствовать высвобождению гистамина in vitro. Помимо этого экспериментально показано, что АТ класса IgE сами являются иммунорегуляторами и усиливают эффект воздействия неспецифических бронхоконстрикторов (гистамина) и аллергенов на гладкую мускулатуру дыхательного тракта [13].

В отличие от IgЕ АТ субкласса IgG4 выполняют при аллергиях не сенсибилизирующую, а "блокирующую" функцию. Блокирующие IgG4-АТ конкурируют с IgE за связь с аллергеном, препятствуя тем самым IgE-опосредованному высвобождению гистамина. В связи с этим толерантность к аллергену сопровождается высокой активностью аллергенспецифического IgG4 и отсутствием ответа со стороны специфического IgE [5].

В то время как первостепенное значение в противовирусной защите секреторного IgA доказано, роль системного (сывороточного) IgA, в том числе при вирусных заболеваниях, мало понятна. Показано, что длительное выявление противовирусного IgA в крови коррелировало с наличием аллергических проявлений и предрасположенностью к развитию астмы [16]. Таким образом, наличие IgA в крови может быть, подобно IgE, маркером развития аллергии.

Число работ, посвященных изучению РСВ-специфического гуморального иммунитета у людей, особенно Th2-опосредованного, невелико. Наличие в крови Th2-зависимых вирусспецифичных АТ (IgE, IgG4, IgA) у детей в возрасте до 2 лет выявлено в немногих случаях при РСВ-опосредованном тяжелом бронхиолите. При более мягком течении первичной РСВИ у маленьких детей АТ этих типов не было обнаружено [3, 18]. Практически нет исследований, посвященных изучению вирусспецифического гуморального иммунитета у детей старшего возраста при повторных эпизодах РСВИ.

Поскольку существует прямая связь между типом цитокиновой регуляции и структурой гуморального ответа при РСВИ [3], сопоставление активности РСВ-специфичных АТ различных классов позволяет судить о характере индуцируемой вирусом иммунной регуляции и оценить возможную роль Th2-зависимых вирусспецифичных АТ в развитии иммунопатологии при РСВИ.

Целью настоящего исследования являлось выявление связи иммунопатологического Th2-опосредованного противовирусного гуморального иммунитета с формированием аллергического компонента (обструкции верхнего и нижнего отделов респираторного тракта) у детей с первичной и повторной РСВИ.

Материалы и методы

Клинические материалы

Были исследованы парные сыворотки крови от 107 детей в возрасте от 7 месяцев до 14 лет с документированной РСВИ. У 27 детей инфекция протекала в неосложненной форме (ОРЗ). Осложнения в виде обструкции верхнего и нижнего отделов дыхательного тракта - стеноза гортани (СГ) I-II cтепени и острого обструктивного бронхита (ООБ) - наблюдались у 34 и 46 пациентов соответственно. Из их числа первичная РСВИ была документирована у 28 детей: 9, 9 и 10 пациентов с ОРЗ, СГ и ООБ соответственно. РСВИ считали первичной, если сыворотки крови, взятые в первые 4 дня заболевания, были отрицательными в ИФА по содержанию антиРСВ АТ всех субклассов IgG. В связи с тем что после перенесенной РСВИ уровень специфических АТ класса IgG в крови, выявляемых в ИФА, остается повышенным в течение длительного времени (до 1 года) [12], пациенты, у которых в первые дни заболевания сыворотки были положительными по содержанию антиРСВ IgG, были включены в группу повторно инфицированных. Средний возраст детей с первичной и повторной РСВИ составил 1,3 + 0,6 и 5,3 + 2,5 года. Сыворотки были взяты в острый период (2-6-й дни от начала заболевания) и в период реконвалесценции (7-14-й дни).

В контрольную группу были включены парные сыворотки от 118 детей с ОРЗ, СГ и ООБ без выявленной РСВИ - 35, 47 и 36 пациентов соответственно. В связи с тем, что первичная инфекция во всех случаях наблюдалась у детей младше 2,5 лет, пациенты контрольной группы с каждой формой респираторной патологии были разделены на две возрастные категории - до 2,5 лет и старше (1,4 + 0,7 и 7,1 + 3,3 года). Дополнительным контролем служили одиночные сыворотки 30 здоровых детей старшего возраста (10,4 + 3,8 лет).

Методы диагностирования вирусных инфекций (РСВИ, гриппозных, аденовирусных, парагриппозных)

Выделение вирусов из носоглоточных смывов и соскобов проводили с использованием перевиваемой культуры клеток почек обезьяны МА-104 и диплоидной культуры фибробластов легкого эмбрионов человека. Детекцию вирусных антигенов (АГ) в эпителиальных клетках из нижних носовых ходов осуществляли методом прямого иммунофлуоресцентного анализа с использованием ФИТЦ-конъюгатов [1], выпускаемых "Предприятием по производству диагностических препаратов" (Санкт-Петербург).

Серологическая диагностика РСВИ, гриппозных (типа А, В) и аденовирусных инфекций состояла в выявлении сероконверсий противовирусных АТ класса IgG в непрямом ИФА с использованием в качестве АГ очищенных ультрацентрифугированием цельновирионных суспензий. Помимо этого наличие сероконверсий вирусспецифичных АТ было проанализировано в реакции связывания комплемента (для РСВ и аденовирусов) и реакции торможения гемаглютинации (для вирусов парагриппа) [1].

Наличие вирусной инфекции, в том числе РСВИ, считалось доказанным, если оно было подтверждено результатами, по крайней мере, двух диагностических методов.

Выявление антиРСВ АТ классов IgA, IgE и субклассов IgG (IgG1, 2, 3, 4) в непрямом ИФА

Планшеты сенсибилизировали цельновирионной суспензией очищенного концентрата РСВ, штамм Long. Культивирование, очистка, концентрация вируса, процедура ИФА описаны ранее [2]. Детекцию АТ, связавшихся с АГ, проводили с применением пероксидазных конъюгатов моноклональных антител к соответствующему классу АТ или субклассу IgG человека (ООО "Полигност", Санкт-Петербург). Субстратная смесь содержала 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (0,1 мг/мл) и 0,02 % Н2О2. Оптическую плотность (ОП) измеряли на спектрофотометре Anthos (Австрия) при длине волны 450 нм (ОП450). Для анализа активности АТ в парных сыворотках были использованы данные, полученные при одном разведении сывороток, предварительно определенном как оптимальные. Эти разведения для суммарного IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE составили 1/400, 1/400, 1/20, 1/40, 1/80, /100, 1/10 соответственно. Для устранения отличий результатов различных опытов среднегрупповой уровень антиРСВ АТ представлен в виде нормализованного показателя, выраженного как средняя арифметическая отношений А/К+, где А - показатель ОП450 исследуемой пробы, К+ - ОП450 положительной сыворотки, используемой в том же разведении в качестве референс-препарата для выявления каждого из типов АТ во всех опытах. Отрицательными по содержанию специфических АТ считались сыворотки, в которых значения ОП450 при анализируемом разведении не превышали 0,25 ("пороговое" значение). Этот показатель был рассчитан ранее по результатам анализа сывороток детей в возрасте 8-10 мес., не болевших РСВИ и уже утративших материнские противовирусные АТ. К положительным по содержанию РСВ-специфических АТ относили сыворотки, у которых ОП450 превышала пороговое значение в 2 раз и более. Сероконверсии признавались достоверными, если значения ОП450 между парными сыворотками различались не менее чем на 0,3.

Статистическая обработка результатов

Обработку данных проводили с применением программы STATISTICA for Windows, 1999. Достоверность отличий между показателями определяли с применением критериев Стьюдента и Манна - Уитни. Для выявления связи между двумя качественными признаками (наличие в крови синхронно высокого и, наоборот, низкого содержания двух различных типов АТ) использовали коэффициент ассоциации Пирсона (RA).

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.


© 2002-2009 Цитокины и Воспаление