Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2005, № 1
|
Новости лабораторной диагностики
|
Номер 1'2005
|
ЗАО "БИОХИММАК"
эксклюзивный дистрибьютoр компаний "Biosource", "Dynal" в России и СНГ
Анализ экспрессии цитокинов методом ПЦР
Цитокины - сигнальные молекулы иммунной системы. Уровень экспрессии этих белков имеет важное диагностическое значение для подбора иммунокорригирующей терапии и прогноза интенсивности и направленности иммунного ответа. Для того чтобы определить, какие цитокины и в каком количестве синтезируются, широко применяется метод ПЦР. Первый этап на пути синтеза белка - синтез мРНК. Зная количественный и качественный состав мРНК в клетке, можно судить об уровне экспрессии соответствующего белка.
ЗАО "БиоХимМак" представляет готовые наборы фирмы "BioSource" для мультиплексного определения экспрессии цитокинов (качественная реакция) и наборы для количественной оценки мРНК методом оптической детекции ПЦР в режиме реального времени (запрашивайте информацию для заказа).
При работе с наборами первым этапом анализа является обратно-транскриптазная реакция синтеза на мРНК первой цепи кДНК с последующей амплификацией методом ПЦР (ОТ-ПЦР).
Получение мРНК - процесс, методические сложности которого связаны с низкой стабильностью РНК и разрушением ее РНКазами, содержащимися в исходном материале. Выделение мРНК на парамагнитных частицах с Oligo (dT)25 (кат. №№ 610.11, 610.12) существенно упрощает процедуру и сокращает время, затрачиваемое на пробоподготовку.
- Процесс получения мРНК занимает ~15 мин.
- Препарат мРНК может быть получен непосредственно из тканей или клеточных суспензий без промежуточных этапов получения общей РНК.
- Лизирующий буфер содержит ингибитор РНКазной активности.
- Частицы не ингибируют ферментативную активность - первую цепь кДНК можно синтезировать непосредственно на частицах, используя олиго(dT)25 в качестве затравки; ПЦР также можно проводить, не элюируя кДНК с частиц.
- Частицы можно регенерировать и использовать несколько раз.
Реагент RNALater позволяет выделять РНК из тканей и клеток без замораживания в жидком азоте и сохранять РНК стабильной при 37 оС в течение дня, при 25 оС в течение недели и при 4 оС в течение месяца (кат. №№ 7020-7024).
В настоящее время известно, что гены, кодирующие экспрессию цитокинов, отличаются полиморфизмом промотора - регуляторной области гена, которая отвечает за уровень экспрессии белка. Таким образом, у разных людей генетически определен исходный уровень экспрессии того или иного цитокина или его рецептора.
Фирмой "Dynal" выпускается набор для типирования различных аллельных вариантов генов цитокинов: IL-1a, IL-1b, IL-1R, IL-1Ra, IL-4Ra, IL-12, IFNg, TGFb, TNFa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 (кат. № 78920-10BY).
Для анализа требуется выделить геномную ДНК. Очень быстрый и эффективный способ получения ДНК - метод очистки с использованием парамагнитных частиц, принципы которого описаны выше. В течение 15-20 мин из 100-500 мкл цельной крови можно получить 5-9 мкг ДНК, очищенной от нежелательных примесей и ингибиторов ПЦР (кат. №№ 631.02, 634.01, 634.02).
ЗАО "БиоХимМак" предлагает широкий спектр тест-систем, использующих метод ИФА и проточной цитометрии, для определения цитокинов, факторов роста, молекул адгезии, матриксных металлопротеиназ и молекул, играющих ключевую роль в апоптозе, производства компаний "BioSource", "Bender Medsystems", "R&D", "Dynal".
ЗАО "БиоХимМак"
119992, Москва, Ленинские горы, МГУ,
тел.: (095) 939-2421, 939-2364;
факс: (095) 939-0997
E-mail: ,
www.biochemmack.ru
Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2005 и 2006 годы!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Начата подписка на 2013 год!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
