197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 234 16 69, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 234 94 89
E-mail:
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2005, № 2

РЕАКЦИЯ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК НА ФЕТАЛЬНЫЕ ПРОТЕИНЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ В ЛЕГКОМ И МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЕ

А.И. Аутеншлюс, А.Н. Шкунов, А.В. Проскура, Ю.В. Седова, С.В. Сидоров, Г.Г. Иванова, Е.С. Михайлова, Д.В. Морозов, К.Г. Рахманов

Изучены показатели реакции мононуклеарных клеток (МНК) на фетальные протеины (ФП) у 105 больных злокачественными новообразованиями легких и молочной железы, и проведено их сопоставление с патогистологическими особенностями опухоли, которым была дана балльная оценка. При возрастании относительного содержания CD8+-лимфоцитов после инкубации МНК с ФП на 15% и более в опухолях преобладали высокодифференцированные клетки, а встречаемость патологических митозов была низкой. Чаще встречалась I, реже II степени злокачественности. При преобладании в опухолях низко- и умереннодифференцированных клеток, встречаемость патологических митозов возрастала. Чаще встречались II и III степени злокачественности. В этих случаях реакция МНК на ФП не наблюдалась. На основе полученных результатов исследования могут быть разработаны методы ранней диагностики злокачественных новообразований. (Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 2. С. 16-23.)

По данным Минздрава РФ, рак легкого (РЛ) по распространенности лидирует среди других онкологических заболеваний человека, а рак молочной железы (РМЖ) является наиболее часто встречающимся злокачественным новообразованием у женщин [5].

Образование злокачественной опухоли сопровождается целым рядом структурных и функциональных изменений, которые отличают ее от нормальной ткани. Одним из признаков, характеризующих опухоль, является экспрессия фетальных протеинов (ФП), относящихся к опухолеассоциированным антигенам [8].

В предыдущих работах нами была изучена реакция лимфоцитов на опухолеассоциированные антигены у больных РЛ и РМЖ, где было показано увеличение относительного содержания клеток, экспрессирующих CD8-антиген, после инкубации мононуклеарных клеток (МНК) с ФП [2, 3].

Целью настоящей работы явилось сопоставление показателей реакции МНК на ФП с содержанием популяций и субпопуляций лимфоцитов и патогистологической картиной опухоли у больных РЛ и РМЖ.

Материалы и методы

Обследовано 105 больных злокачественными новообразованиями, из них РЛ был у 75 человек в возрасте от 30 до 75 лет и РМЖ - у 30 пациенток в возрасте от 38 до 79 лет. В контрольную группу вошли 17 здоровых лиц, не имеющих в анамнезе указаний на онкологические заболевания.

Центральная форма РЛ диагностирована у 54 (72 %) пациентов, периферическая - у 21 (28 %) человека. Изменения в легких обнаружены у 29 пациентов (38,6 %) при проведении профилактического флюорографического исследования, у остальных 46 (61,4 %) - при обращении за врачебной помощью. Бронхолегочно-плевральный синдром был выявлен у 56 (74,7 %) больных, синдром интоксикации различной степени выраженности у 15 (20 %) больных. По результатам патоморфологического изучения резецированной опухоли плоскоклеточный рак легкого диагностирован у 50 (66,7 %) человек, аденокарцинома - у 25 (33,3 %) больных.

РМЖ у 24 (80 %) пациенток был выявлен при обращении к врачу, у остальных 6 (20 %) - при проведении профилактического осмотра. По гистологическому строению у всех больных был выявлен инфильтративный протоковый рак.

До оперативного вмешательства больные со злокачественными новообразованиями не подвергались лучевой химиотерапии.

Определение относительного содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов проводили методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител серии ИКО (НПЦ "Медбиоспектр", Москва) в соответствии с прилагаемыми рекомендациями. В работе использованы моноклональные антитела: ИКО 90 - маркер зрелых Т-лимфоцитов (CD3+-клетки), ИКО 86 - маркер Т-хелперов/индукторов (CD4+-клетки), ИКО 31 - маркер Т-супрессоров/цитотоксических лимфоцитов (CD8+-клетки), ИКО 180 - маркер В-лимфоцитов (CD20+-клетки), ИКО 116 - маркер натуральных киллеров (CD16+-клетки), ИКО 160 - маркер клеток, имеющих FAS-антиген (CD95+-клетки), ИКО 105 - маркер клеток, имеющих рецептор к IL-2 (CD25+-клетки), ИКО 92 - маркер клеток, имеющих рецептор к трансферрину (CD71+-клетки), ИКО 20 - маркер активированных Т- и В-клеток (CD38+-клетки).

В качестве опухолеассоциированных антигенов применяли ФП в изотоническом растворе хлорида натрия, содержащие раковоэмбриональный антиген - 84 МЕ/мл, хорионический гонадотропин человека - 170 МЕ/мл, нейронспецифическую енолазу - 1,35 МЕ/мл, углеводные антигены - СА-19-9 - 144 МЕ/мл и СА 125 - 512 МЕ/мл, альфа-фетопротеин - 172 МЕ/мл и микроглобулин человека - 4 МЕ/мл. Оценку реакции на ФП проводили в соответствии с патентом № 2118819 по изменению относительного содержания CD8+-лимфоцитов после инкубации МНК с ФП (100 мкл, исходная концентрация белка 2,5 мг/мл) in vitro в течение 1 ч по сравнению с контрольной пробой, содержащей вместо ФП 100 мкл изотонического раствора хлорида натрия.

Для подтверждения специфичности реакции параллельно инкубировали МНК с раствором бычьего сывороточного альбумина по указанной выше технологии и в той же концентрации по белку.

Позитивной считалась реакция, при которой относительное содержание CD8+-лимфоцитов повышалось после инкубации МНК с ФП на 15 % и более по сравнению с соответствующей контрольной пробой [4]. Во всех остальных случаях реакция считалась негативной. Пороговое значение достоверности реакции на ФП, равное 15 %, превышает допустимый предел ошибки [6].

После хирургического вмешательства проводилось гистологическое исследование резецированного материала, окрашенного по стандартной методике гематоксилином-эозином. Патогистологическая картина характеризовалась следующими признаками, которым была дана балльная оценка:

• границы опухоли с окружающей тканью: четкие - 1 балл; наряду с четкими границами имеются крупные участки ответвления - 2 балла; наряду с четкими границами опухолевого узла имеются мелкие тонкие тяжи - 3 балла; четкость границ отсутствует, имеется диффузный рост опухоли - 4 балла;
• наличие опухолевых клеток в сосудах (ОКС): опухолевых клеток в сосудах нет - 1 балл; наличие опухолевых клеток в сосудах сомнительно - 2 балла; единичные клетки в сосудах - 3 балла; много клеток в сосудах - 4 балла;
• инфильтрация: отсутствует - 1 балл; слабая - 2 балла; умеренная - 3 балла; выраженная - 4 балла;
• число митозов в поле зрения: отсутствуют - 1 балл; единичные - 2 балла; 2-3 - 3 балла; 4-5 - 4 балла; 6-10 - 5 баллов; более 10 - 6 баллов;
• патологические митозы: отсутствуют - 1 балл; единичные - 2 балла; в большом количестве - 3 балла;
• наличие в опухоли клеточных элементов различной степени дифференцировки: высокодифференцированные (ВД) - 1 балл; умереннодифференцированные (УД) - 2 балла, низкодифференцированные (НД) - 3 балла;
• степень злокачественности: I степень - 1 балл; II степень - 2 балла; III степень - 3 балла;
• метастазы (МТС) в регионарных лимфоузлах: нет - 0 баллов, есть - 1 балл.

Таким образом, сумма баллов указанных выше признаков является интегральным показателем патогистологической картины опухоли.

Кроме того, учитывали частоту встречаемости опухолевых клеток различной степени зрелости (%), а также их соотношения (НД/УД, НД/ВД, УД/ВД). Для этого с помощью морфометрической сетки с 121 рабочими точками-узлами, вставленной в окуляр микроскопа, при увеличении 20 x 1,5 x 10=300 методом случайного наложения сетки на опухолевую ткань подсчитывали количество точек, попавших на высоко-, умеренно- и низкодифференцированную опухолевую ткань. В каждом случае подсчитывали среднее арифметическое значение, выраженное в процентах [1]. По общепринятым критериям оценивали степень злокачественности опухоли [7].

Указанные выше признаки, представленные в числовых значениях, позволили выявить взаимосвязь между показателями реакции лимфоцитов на ФП и патогистологической картиной опухоли.

Результаты исследований обработаны статистически с использованием критериев Стьюдента (t), Вилкоксона - Манна - Уитни (U) и коэффициента корреляции (r) по программе StatGraphicsPlus.

Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2005 и 2006 годы!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.