197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2005, № 2

ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ РОНКОЛЕЙКИНА ДЛЯ LАК-ТЕРАПИИ РАКА ЯИЧНИКА

Е.Ю. Златник, Л.Ю. Голотина

Исследовали возможность применения в LAK-терапии больных раком яичника Ронколейкина - препарата рекомбинантного IL-2. В качестве источника лимфоцитов использовали лимфу грудного протока больных, получавших также аутолимфохимиотерапию. Изучение иммунобиологических свойств лимфоцитов лимфы после кратковременной инкубации (30 мин) и более длительного культивирования (24 и 48 ч) с Ронколейкином показало, что под действием этого препарата происходит усиление пролиферации Т-лимфоцитов, аутокринной стимуляции продукции IL-2, повышение эффекторных свойств NК-клеток, а также установлено прямое цитотоксическое действие Ронколейкина на культуру клеток линии К562 и сенсибилизирующий эффект - способность повышать ее чувствительность к лизису NК-клетками. LAK-терапия с Ронколейкином была применена в комплексном лечении больных раком яичника. Достигнутый эффект дает основание считать метод перспективным для лечения этого заболевания. (Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 2. С. 54-58.)

Цитокинотерапия онкологических заболеваний является одним из наиболее современных и перспективных направлений в онкоиммунологии. Несмотря на то, что идея адаптивной иммунотерапии (LAK-терапии) с применением IL-2 была высказана еще в 80-х годах ХХ века [16], ее потенциал далеко не исчерпан, и в настоящее время определяется, прежде всего, возможностью использования рекомбинантных цитокинов, их различных сочетаний, а также расширением спектра тех заболеваний, при которых такое лечение представляется целесообразным.

Ронколейкин как препарат рекомбинантного IL-2 нашел применение в лечении различных заболеваний, в том числе онкологических [2, 4, 5, 7]. Он используется как для внутривенного капельного введения, так и для культивирования с ним лимфоцитов, в ходе которого происходит генерация естественных цитотоксических клеток и LАК-клеток [1,16]; описаны также варианты, сочетающие оба подхода [2]. При этом стимулируются не только NK-клетки, но, видимо, и макрофаги, поскольку IL-2 при действии in vitro усиливает продукцию монокинов TNFa и IL-8, которые, в свою очередь, потенциируют эффекты IL-2 [9]. Введение аутологичных лимфоцитов после культивирования с IL-2 приводит не только к повышению их цитотоксической активности и расширению спектра клеток-мишеней, но и к снижению побочных реакций этого цитокина, которые при использовании его высоких доз бывают весьма значительными [2, 11]. Следует отметить, что первоначально применение IL-2, в том числе в виде LАК-терапии, считалось эффективным не при всех опухолях, а преимущественно при меланоме, почечно-клеточном раке, некоторых лимфопролиферативных заболеваниях [7, 18], особенно при использовании в рамках монотерапии. Однако в последние годы появились сообщения об успешном применении данного препарата при раке легкого [4], эндометриозе [6] в качестве одного из компонентов комплексного лечения этих заболеваний.

Было проведено исследование влияния совместной инкубации Ронколейкина с клетками лимфы грудного протока больных раком яичника на иммунобиологическое состояние лимфоцитов, а также предпринято использование LAК-терапии в комплексном лечении этих больных.

Материалы и методы

Учитывая данные литературы о дозовой и временной зависимости эффекта, известной для многих цитокинов [11], при постановке опытов были применены различные концентрации препарата и сроки инкубации. Лимфу грудного протока больных местно-распространенным и генерализованным раком яичника (350-400 мл) инкубировали в присутствии 2 x 10⁶ МЕ Ронколейкина. При этом в зависимости от цитоза приходилось 0,4-2,0 МЕ препарата на каждый лимфоцит. Проводили инкубацию лимфы с Ронколейкином в течение 30 мин при 37 °С, а также культивирование в полной культуральной среде, содержащей среду RPMI-1640 с 10 % инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (Flow Lab.), 5 x 10^-5 М 2-меркаптоэтанола (Serva), 2 мМ L-глютамина, 10 мМ буфера HEPES (Flow Lab.), 50 мкг/мл гентамицина, в присутствии 5 % СО2 в течение 24 и 48 ч. До и после культивирования изучали иммунофенотип лимфоцитов в непрямом иммунофлюоресцентном тесте с моноклональными антителами (Сорбент) и функциональную активность лимфоцитов в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) с ФГА, КонА и ЛПС [10].

С целью изучения действия препарата на естественную цитотоксичность были проведены опыты по раздельной оценке его влияния на гибель клеток-мишеней К562 (клетки эритромиелолейкоза человека) и на функцию клеток-эффекторов (NК-клеток). Для этого Ронколейкин в концентрации 5, 50 и 5000 МЕ/мл инкубировали в течение 30 мин при 37 °С:

• с клетками-мишенями без клеток-эффекторов (контроль);
• с клетками-мишенями, к которым затем добавляли интактные клетки-эффекторы (опыт № 1);
• с клетками-эффекторами, к которым затем добавляли интактные клетки-мишени (опыт № 2).

Во всех случаях клетки трехкратно отмывали и ставили цитотоксический тест (ЦТТ), включающий культивирование проб в течение 24 ч при 37 °С с последующим определением процента гибели клеток-мишеней и расчетом индекса цитотоксичности (ИЦ) по формуле:

ИЦ = (О - К)/К,

где О (опыт) - % погибших клеток-мишеней в присутствии клеток-эффекторов, К (контроль) - % погибших клеток-мишеней в присутствии среды.

Определение продукции IL-2 проводили в опытах с культурами клеток-продуцентов этого цитокина (Т-лимфобластной линии Jurkat). Оценивали их пролиферацию при культивировании с добавлением Ронколейкина (опыт), среды RРMI-1640 (контроль) и альбумина (контроль). Кроме того, супернатанты опытных и контрольных 48-часовых культур Jurkat добавляли к культивируемым спленоцитам мышей линии СВА и изучали их пролиферацию по результатам спонтанной 72-часовой РБТЛ.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием метода непрямых разностей и критерия Уилкоксона - Манна - Уитни.

Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2005 и 2006 годы!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2014 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.