Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2005, № 4
|
Оригинальные статьи
|
Номер 4'2005
|
ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ ЭРИТРОКАРИОЦИТАМИ КОСТНОГО МОЗГА БОЛЬНЫХ ЛИМФОМАМИ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ХИМИОТЕРАПИИ
В.В. Денисова, А.Д. Кулагин, И.А. Лисуков, И.В. Крючкова, С.А. Сизикова, С.В. Сенников, В.А. Козлов
Как показано ранее, эритроидные ядросодержащие клетки (ЭЯК) способны продуцировать цитокины, регулирующие гемоиммунопоэз в норме. Нами было проведено сравнительное исследование продукции цитокинов Гликофорин А-позитивными ЭЯК костного мозга (КМ) здоровых доноров и пациентов с лимфомами до и после химиотерапии. Анализ проведен в следующих группах: 1) здоровые доноры; 2) больные с неходжкинскими агрессивными лимфомами и лимфомами Ходжкина до лечения; 3) больные после химиотерапии (СHOP-подобные курсы и/или BEAM с аутологичной ТСКК). ЭЯК КМ выделяли методом пеннинга с использованием Гликофорин-А специфичных антител. После культивирования клеток оценивали концентрации цитокинов в их кондиционных средах методом мультиплексного анализа на приборе BioPlex (BioRad, USA). Выявлена способность ЭЯК продуцировать IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, IL-17, TNFa, IFNg, G-CSF, GM-CSF, MCP-1, MIP-1b, но не IL-5, IL-7, IL-12(p70). У больных с лимфомами как до, так и после лечения, несмотря на достижение ремиссии опухоли, выявлено достоверное снижение уровня продуцируемых ЭЯК IL-1b, IL-4, IL-10, IL-6, IL-8, IL-17, G-CSF, MCP-1, MIP-1b, что может быть следствием влияния химиотерапии или неадекватной регуляции секреторной функции ЭЯК костномозговым микроокружением. (Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 4. С. 17-21.)
В результате изучения иммунных и иммунорегуляторных функций эритроидных ядросодержащих клеток (ЭЯК) было показано, что эритрокариоциты мыши способны к ауторегуляции, подавляют рост малигнизированных клеток и стимулируют естественную противоопухолевую активность клеток костного мозга (КМ) [11]. По крайней мере, часть этих функций эритрокариоциты осуществляют посредством продукции цитокинов. К настоящему времени показана способность ЭЯК различных гемопоэтических органов млекопитающих продуцировать IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TGFb1, IFNg, TNFa, VEGF [7, 12]. Эти фундаментальные данные являются объективной основой для изучения роли секреторной функции эритрокариоцитов в патогенезе опухолевых заболеваний, которые часто сопровождаются нарушением эритропоэза и, как следствие, анемией [5]. Так, анемии диагностируются в среднем у 30 % пациентов с лимфомами и ассоциируются с плохим прогнозом течения заболевания [10].
Несмотря на активную разработку методов иммунотерапии, химиотерапия пока является единственным методом лечения онкогематологических заболеваний, позволяющим достигать длительных ремиссий или даже выздоровления больных [2]. К сожалению, цитостатики действуют не избирательно и являются ятрогенным повреждающим фактором в отношении нормальных клеток при терапии опухолей [3]. Эритрокариоциты в данном случае не являются исключением, т. к. постцитостатическая анемия - частое осложнение химиотерапии [3, 9]. Помимо нарушения пролиферации, цитостатики индуцируют функциональные дефекты нормальных клеток, сохраняющиеся в отдаленный период [7, 13, 14]. Подобного действия цитостатиков нельзя исключить и в отношении эритрокариоцитов. Дефекты эритрокариоцитов, индуцированные цитостатиками, могут быть причиной нарушения их синтезирующей функции и, как следствие - дизгемопоэтических состояний [4].
И если значение иммунокомпетентных клеток при разных патологиях изучается активно, то роль иммунорегуляторных функций эритрокариоцитов практически не исследована. В связи с этим и было предпринято изучение продукции цитокинов эритрокариоцитами КМ больных лимфомами при проведении химиотерапии.
Материалы и методы
Цитокинсинтезирующую активность ЭЯК КМ оценивали у больных агрессивными крупноклеточными неходжкинскими В-диффузными, Т-анапластическими лимфомами (НХЛ) и лимфомами Ходжкина (ЛХ). В исследование не включались больные с лейкемической трансформацией НХЛ. Все пациенты получали стандартную ПХТ: 1-я линия - CHOP при НХЛ, ABVD при ЛГМ, 2-я линия высокодозной ПХТ - DHAP или BAEM с аутологичной трансплантацией СКК (ауто-ТСКК). Анализ результатов исследований проводили в трех группах: 1-я группа - до лечения, 2-я группа - после 4-8 курсов ПХТ 1-й линии, 3-я группа - после 2-6 курсов ПХТ 2-й линии и/или ауто-ТСКК. Условиями для выборки двух последних групп являлась установленная после рестажирования ремиссия заболевания (для исключения цитокинпродуцирующей активности опухоли), а также восстановление показателей периферической крови (Hb " 100 г/л, нейтрофилы " 500/мкл и тромбоциты " 50 тыс/мкл). Контрольную группу составили 16 практически здоровых добровольных доноров в возрасте от 18 до 40 лет. Все группы были сопоставимы по полу и возрасту. Все обследованные были информированы о целях и методах исследования, получено их добровольное согласие.
Аспираты КМ в объеме 15-20 мл получали при проведении трепанобиопсии в период диагностики заболевания и при проведении очередного рестажирования. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли в градиенте плотности фиколла-верографина (1,077 г/см3). Позитивная селекция Гликофорин А (ГкА)-позитивных ЭЯК (ГкА+-ЭЯК) из популяции МНК КМ производилась методом непрямого пеннинга с использованием моноклональных антител к человеческому ГкА (Harlan Sera-Lab, UK Abcam Ltd., UK, или BD PharMingen, USA). Контроль чистоты выделенной популяции осуществляли стандартной окраской мазка клеточной взвеси по Романовскому-Гимза и окраской внутриклеточного гемоглобина. Процент эритроидных (гемоглобин-содержащих) клеток составлял более 97 %. После селекции ГкА+-ЭЯК культивировали в концентрации 1 млн/мл в течение 24 ч в среде RPMI 1640. Образцы кондиционной среды хранили при -20°С в аликвотах по 120 мкл до момента определения цитокинов.
Количественные значения IL-1b, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-17, TNFa, IFNg, G-GSF, GM-GSF, MCP-1, MIP-1b в кондиционных средах клеточных культур оценивали методом проточной иммунофлюоресценции на двухлучевом лазерном автоматизированном анализаторе (Bio-Plex Protein Assay System, Bio-Rad, США). Перед исследованием кондиционные среды размораживали и фильтровали через одноразовые нитроцеллюлозные фильтры с порами 0,4 мкм в диаметре. Для исследования концентрации цитокинов в 50 мкл образца использовали коммерческую систему HUMAN 17-PLEX (N171A11171) и HUMAN CYTOKINE TH1/TH2 (N171A11081 (Bio-Rad, США) в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Для исключения "эффекта матрикса" при обработке полученных результатов в качестве растворов для рекомбинантных цитокинов использовали идентичные среды с одинаковым содержанием сыворотки. Диапазон измерений - от 2 пкг/мл до 32000 пкг/мл. Концентрацию цитокинов рассчитывали при помощи программного обеспечения, поставляемого фирмой Bio-Rad (Bio-Plex Manadger 3.0), относительно стандартных калибровочных разведений. Статистическую обработку полученных результатов проводили непараметрическими методами (программа "Statistica 5.0").
Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2005 и 2006 годы!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Начата подписка на 2010 год! 
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
