197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 234 16 69, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 234 94 89
E-mail:
Web: cytokines.ru

Скидки на компостер от производителя! Финский компостер ! - компостер высокого качества  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2006, № 1

ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ ДЕЦИДУАЛЬНЫМИ МАКРОФАГАМИ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И СИНДРОМЕ ЗАДЕРЖКИ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ ПЛОДА

Н.Ю. Сотникова, А.В. Кудряшова, Н.В. Крошкина, И.А. Панова, М.В. Веденеева, Ю.В. Гагаева

Методом проточной цитометрии выявлено снижение внутриклеточного синтеза IL-1b, IL-10, IL-12 в макрофагах децидуальной оболочки плаценты женщин с синдромом задержки развития плода (СЗРП). В экстрактах децидуальной ткани при СЗРП были снижены уровни IL-1b и IL-10 и повышено содержание IL-12. Децидуальные макрофаги при СЗРП характеризовались сниженной экспрессией антигенов MHC II и увеличением пула CD11b+-клеток. Таким образом, при СЗРП в децидуальной оболочке плаценты наблюдается неадекватная активация децидуальных макрофагов, сопровождающаяся нарушением их синтетической и антигенпрезентирующей функции. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 1. С. 16-20.)

Беременность - физиологический процесс, во время которого действуют особые механизмы, регулирующие взаимоотношения между аллогенными организмами. Основные события, определяющие процессы формирования и роста плаценты, а также выполнения ее барьерной и трофической функций происходят в зоне разделения кровотока матери и плода - в децидуальной оболочке плаценты (ДО) [7]. Как показывают многочисленные исследования, главными действующими лицами во всех этих процессах выступают клетки иммунной системы, инфильтрирующие децидуальную ткань [8]. Имеющиеся литературные данные свидетельствуют о том, что нарушение процессов активации и дифференцировки клеток, продукции и рецепции цитокинов способствует развитию акушерской и перинатальной патологии [18]. На экспериментальной модели синдрома задержки развития плода (СЗРП) было показано наличие аккумуляции лейкоцитов в ткани матки [14]. Данные ряда исследователей свидетельствуют об изменении продукции ряда ростовых и провоспалительных цитокинов при СЗРП [10, 15]. Активными продуцентами цитокинов, регулирующих направленность иммунного ответа, являются макрофаги [5], однако данные о продукции цитокинов макрофагами ДО немногочисленны. В то же время децидуальные макрофаги не только обеспечивают барьерную функцию плаценты, но и продуцируют широкий спектр ростовых факторов, регулирующих процессы роста трофобласта, ангиогенеза и децидуализации эндометрия [6].

Целью проведенного исследования было определить особенности функциональной активности децидуальных макрофагов при СЗРП.

Материалы и методы

Материалом для исследования служили плаценты, полученные в результате своевременных родов в сроке 38-40 недель гестации. Группу с физиологическим течением беременности (ФБ) составили 32 женщины с неосложненным течением беременности, родившие детей без перинатальной патологии, группу с СЗРП - 25 женщин, беременность которых не сопровождалась выраженной угрозой невынашивания и гестозом. Однако на момент обследования в группе женщин с СЗРП в 36 % случаев отмечались признаки экстрагенитальной патологии в виде анемии I и II степени, в 68 % случаев - признаки хронической внутриутробной гипоксии плода, в 44 % - признаки фетоплацентарной недостаточности. Дети, родившиеся в данной группе, имели признаки СЗРП I и II степени асимметричного типа (76 % и 24 %, соответственно).

Плаценту получали в течение 10-15 мин после родов. Поверхность плаценты со стороны базальной пластинки омывали от крови большим количеством физиологического раствора (ФР). Децидуальная ткань срезалась ножницами небольшими пластинами площадью до 3 см2, причем толщина срезаемого слоя не превышала 1 мм. Кусочки ткани помещали в химические стаканы, содержавшие 200 мл ФР, отмывали от крови и от клеток трофобласта, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 мин.

Для получения экстрактов отмытые кусочки децидуальной ткани слегка подсушивали на фильтровальной бумаге и взвешивали. Затем ткань растирали пестиком в фарфоровой ступке и гомогенизировали до однородной кремообразной массы. К полученному гомогенату добавляли ФР в объеме, равном изначальному весу децидуальной ткани (на 1 г ткани - 1 мл ФР). Взвесь помещали в пластиковые пробирки Falcon и подвергали замораживанию при -20 °С в течение суток. Затем гомогенат размораживали и ультрацентрифугировали 30 мин при 4000 об./мин при температуре +4 °С. Надосадочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при -20 °С до проведения ИФА.

Мононуклеарные клетки из ДО выделяли бесферментативным методом, путем механического измельчения кусочков ткани ножницами до кашеобразного состояния на часовом стекле. Затем полученную массу гомогенизировали в фарфоровой ступке и помещали в химические стаканы с 50-100 мл среды 199. Взвесь клеток перемешивали в течение 15-20 мин при комнатной температуре на магнитной мешалке. При этом большинство клеток лейкоцитарного инфильтрата вымывались из измельченной ткани в среду 199. Далее клетки фильтровали через 8 слоев плотной марли и осаждали центрифугированием при 1500 об./мин. Все выделенные клетки ресуспендировали в 6 мл среды 199, наслаивали на градиент плотности фиколла-урографина (d = 1,114 г/см3) и центрифугировали при 1500 об./мин 30 минут. Кольцо клеток на границе фаз среды 199 и фиколла-урографина содержало чистую фракцию мононуклеарных клеток децидуальной оболочки плаценты, содержащую 25-35 % лимфоцитов, 60-70 % макрофагов и менее 5 % детрита. Полученные клетки отмывали центрифугированием при 1500 об./мин 10 минут и доводили средой 199 до концентрации 2 x 10⁶ в 1 мл. При помощи данного бесферментативного метода были получены 0,2-0,5 x 10⁶ клеток из 1 г децидуальной ткани.

Внутриклеточную экспрессию цитокинов оценивали методом проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickinson, USA) с использованием моноклональных антител ICO-1 (анти-HLA-DR), ICO-46 (анти-CD45), ICO-116 (анти-CD16), ICO-174 (анти-CD14), ICO-GM1 (анти-CD11b) производства НПЦ "МедБиоСпектр" (Москва); анти-IL-1b, анти-IL-6, анти-IL-10, анти-IL-12 и анти-IFNg фирмы "CALTAG Laboratories" (USA). Макрофагальный гейт строили по экспрессии антигенов CD14 и CD45.

ИФА проводили на микропланшетном ридере Multiscan EX, Labsystems (Finland). Использовали тест-системы следующих фирм: IL-1b и IFNg производства ООО "Цитокин" (С.-Петербург); IL-6, VEGF и EGF фирмы "CYTIMMUNE" (USA); IL-10 и IL-12р70 фирмы "DIACLONE" (France); PLGF фирмы "R&D Systems" (USA); TGFb2 компании "Bender MedSystems" (Austria); эндотелин производства "BIOMEDICA" (Austria).

Статистическая обработка данных включала определение среднего арифметического и ошибки среднего арифметического. Достоверность различий рассчитывали по t-критерию Стьюдента.

Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2005 и 2006 годы!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.