Научно-практический журнал
[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'

197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: cytokines.ru


  


2016 год
1 номер 2 номер

О Журнале

Текущий год
Архив

Рубрики
Подписка

NEW Книжная полка
NEW Стол заказов

Карта сайта
Правила для авторов

Поиск

Контакты
Наши партнеры:

https://pornoseksxxx.com/

Русский языкEnglish language
Карта сайта Написать письмо, наши координаты

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2006, № 1

Заказать эту статью в PDF

Оригинальные статьи

Номер 1'2006

ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ TNF-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА ВИРУСА НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ НА РАЗВИТИЕ ЛПС-ИНДУЦИРОВАННОГО ЭНДОТОКСИЧЕСКОГО ШОКА

И.П. Гилева, Е.М. Малкова, Т.С. Непомнящих, И.В. Виноградов, Л.Р. Лебедев, Г.В. Кочнева, А.А. Гражданцева, Е.И. Рябчикова, С.Н. Щелкунов

Влияние рекомбинантного TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы (VARV-CrmB) на развитие эндотоксического шока изучали на SPF-мышах линии BALB/c. Шок индуцировали в/б введением сенсибилизирующей (300 мкг/мышь) и, через 16 ч, разрешающей доз ЛПС (350 мкг/мышь), что приводило к 80-100%-ной гибели мышей в течение 72 ч. Концентрация TNF в сыворотке крови через 1 ч после введения разрешающей дозы ЛПС достигала 600-800 пг/мл с последующим ее снижением через 24 ч до уровня < 5пг/мл. Концентрация IFNg в сыворотке крови на фоне шока не изменялась и не превышала уровня 5 пг/мл. Патоморфологическая картина сердца, головного мозга, легкого, печени, почек и брыжейки соответствовала описанной в литературе при экспериментальном эндотоксическом шоке у мышей, включая развитие инфарктов сердца и острой почечной недостаточности. Введение мышам в/б белка VARV-CrmB в дозах 0,2 мкг/мышь и 2 мкг/мышь за 30 мин до инъекции разрешающей дозы ЛПС увеличивало выживаемость животных в группах до 47+10,9 % и 62+8,6 % соответственно. Гистологическое изучение внутренних органов, брыжейки и головного мозга показало, что белок VARV-CrmB в течение первых 24 ч предупреждает появление инфарктов в сердце, снижает степень нарушений кровообращения в сосудах внутренних органов, головного мозга и брыжейки. В период 24-48 ч наблюдается дальнейшая нормализация микроциркуляции и кровоснабжения головного мозга и внутренних органов, не развивается острая почечная недостаточность. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 1. С. 44-49.)

Ключевые слова: эндотоксический шок, вирус натуральной оспы, TNF-связывающий белок, патогистологические изменения.

В ходе эволюции вирусами выработаны различные стратегии преодоления защитных реакций организма, развивающихся в ответ на инфекцию. Геномы ДНК-содержащих поксвирусов (180-230 тыс.п.н.) кодируют широкий спектр белковых факторов, которые эффективно нейтрализуют антивирусный ответ организма-хозяина, ингибируя процессы апоптоза, продукцию интерферонов, хемокинов и воспалительных цитокинов, активность системы комплемента, функции цитотоксических лимфоцитов и натуральных киллеров [8-10]. Изучение молекулярных механизмов взаимодействия поксвирусных белков c защитными системами человека открывает возможность их использования в терапии различных заболеваний. Показано, что некоторые поксвирусные белки проявляли активность в ингибировании реакции отторжения алло- и ксенотрансплантатов [12, 15], воспалительных реакций [13, 14], а также бронхоспазма и клеточной инфильтрации в экспериментальной модели бронхиальной астмы [11].

Фактор некроза опухолей (TNF) принимает участие в реализации многих патологических реакций в организме, в частности эндотоксического шока [5]. Разработка препаратов, способных модулировать выработку и/или действие TNF, представляет интерес в плане создания новых лекарственных препаратов. Одним из кандидатов на роль такого препарата может быть TNF-связывающий белок вируса натуральной оспы (VARV-CrmB) [8]. Нами получен рекомбинантный бакуловирус BTRi67, содержащий в составе своей ДНК ген G2R, кодирующий этот белок. Данный бакуловирус в клетках насекомых линии Sf21 детерминирует синтез секретируемого рекомбинантного белка VARV-CrmB [2]. Разработан способ выделения этого белка из культуральной среды [4]. Полученный рекомбинантный белок эффективно ингибирует цитотоксическое действие человеческого, мышиного и кроличьего TNF на культуру мышиных фибробластов линии L929 [3].

Цель данного исследования - изучение влияния белка VARV-CrmB на характер патологогистологических изменений органов и выживаемость мышей при эндотоксическом шоке, вызванном введением бактериального липополисахарида (ЛПС).

Материалы и методы

Реагенты. Рекомбинантный белок VARV-CrmB выделяли по методу, описанному в работе Л.Р. Лебедева и др.[4]. Эндотоксический шок индуцировали бактериальным ЛПС L2880 E. coli серотипа 055:B5 (Sigma, USA).

Животные. Самцов мышей линии BALB/с (возраст 3-4 недели), свободных от патогенной микрофлоры (SPF), получали из НПП "Питомник лабораторных животных" филиала института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова (г. Пущино Московской обл.). Опыты на животных проводили после двухнедельной адаптации в соотвествии с Протоколом, утвержденным Биоэтическим комитетом ГНЦ ВБ "Вектор". Группы по 8-10 мышей формировали для визуального наблюдения и изучения выживаемости; и по 15-20 животных - для получения сывороток. Эксперименты повторяли от 2 до 6 раз.

Индукция эндотоксического шока и изучение действия рекомбинаниного белка VARV-CrmB. Контрольным животным дважды (через 16 ч) вводили в/б по 100 мкл 0,9%-ного раствора хлорида натрия (группа 1). Эндотоксический шок вызывали введением сенсибилизирующей (300 мкг/мышь) и, через 16 ч, разрешающей доз ЛПС (350 мкг/мышь) в 100 мкл 0,9%-ного раствора хлорида натрия (группа 2).

Белок VARV-CrmB вводили мышам в/б за 30 мин до введения разрешающей дозы ЛПС (0,2 мкг/мышь) (группа 3). Мыши группы 4 по этой же схеме получали белок VARV-CrmB в дозе 2 мкг/мышь. По этой же схеме вводили в/б рекомбинантный белок VARV-CrmB контрольным мышам в дозах 0,2 мкг/мышь и 2 мкг/мышь (группы 5 и 6).

Наблюдение за животными и учет гибели проводили в течение 72 ч.

Гистологическое исследование проводили на мышах групп 1, 2, 4 и 6, включавших 4, 38, 39 и 23 животных соответственно. Животных умерщвляли путем декомпозиции шейных позвонков через 1, 3, 6, 24, 30 и 48 ч после индукции шока. Иссекали образцы головного мозга, миокарда, печени, легких и почек и фиксировали в 4%-ном растворе параформальдегида. Проводку в гистологическом автомате и заливку в парафин осуществляли стандартным методом. С каждого образца готовили 3-5 срезов, которые окрашивали по стандартной методике гематоксилином и эозином. У этих же животных иссекали брыжейку вместе с тонкой кишкой, растягивали на предметном стекле и высушивали в холодильнике на воздухе. Готовый препарат исследовали в бинокулярной лупе МБС-1 при различных увеличениях. Просмотр препаратов и микрофотосъемку проводили на световом микроскопе Jenaval (Carl Zeiss, Jena, Germany).

Получение и анализ сывороток крови. У животных 1-й и 2-й групп индивидуально забирали кровь из ретроорбитального синуса через 1, 3, 6 и 24 ч после введения разрешающей дозы ЛПС, выдерживали при комнатной температуре до образования сгустка. Образцы сывороток получали путем центрифугирования крови при 1000 g в течение 10 мин, затем помещали в пробирки и хранили при -70 °С. Концентрацию TNF и IFNg в сыворотках крови определяли иммуноферментным методом, используя наборы DueSet Mouse TNF и DueSet Mouse IFNg (R&D Systems, USA). Оптическую плотность в 96-луночных планшетах измеряли на приборе Microplate Reader ELX808, (Bio-Tek Instruments, Inc., USA) при длине волны 490 нм.

Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2005 и 2006 годы!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

© 2002-2017 Цитокины и Воспаление