197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 234 16 69, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 234 94 89
E-mail:
Web: cytokines.ru

зарегистрировать домен  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2006, № 3

ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЦИТОКИНИНДУЦИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА АНГИОТЕНЗИНА II И МЕХАНИЗМ АНТИЦИТОКИНОВЫХ ЭФФЕКТОВ ИНГИБИТОРА АНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА КАПТОПРИЛА

А.Г. Соловьев, Л.Л. Резников, П.Г. Назаров, C.A. Dinarello

Ангиотензин II (Анг2) является одним из мощных факторов, вовлеченных в развитие прогрессивного тубулоинтерстициального повреждения, а также острого повреждения почек, ведущих к почечной недостаточности. Наряду с известными гемодинамическими свойствами, обнаружены новые свойства Анг2, позволяющие относиться к Ангиотензину II, как к многофункциональному цитокиноподобному фактору. По данным литературы, применение препаратов группы ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента in vivo и in vitro давало видимый антицитокиновый эффект в экспериментах на лабораторных животных и культурах клеток. На модели культуры клеток крови человека in vitro нами установлено: человеческий AngII способен индуцировать синтез IL-1b, IL-8, TNFa, IL-1Ra. Синтез IL-8 не зависит от IL-18. In vitro кровь способна к спонтанному синтезу Анг2, сходному по кинетике и уровню к синтезу Анг2 в присутствии LPS. Каптоприл способен блокировать синтез IL-1b и IL-8 независимо от ингибирования ангиотензинпревращающего фермента. (Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 3. С. 40-45.)

Проблема лечения и предупреждения почечной недостаточности является одной из центральных проблем в мировой нефрологии. Эта проблема тесно связана с клинической практикой специалистов разного профиля и, следовательно, существует множество различных подходов к пониманию механизмов и терапевтических стратегий лечения.

Острая почечная недостаточность (ОПН) составляет 5 % всех поступлений в стационары, смертность при этом остается в пределах 30-80 %. Наиболее частыми причинами развития ОПН у стационарных больных являются ишемия и сепсис [12], однако механизмы патогенеза во многих случаях остаются неясными [10, 19]. Известно, что ангиотензин II (Анг2) является одним из мощных факторов, вовлеченных в развитие прогрессивного тубулоинтерстициального повреждения [3, 13, 19]. Как показали клинические исследования, использование ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (ACEi) замедляет прогрессирование заболеваний почек и исход в терминальную почечную недостаточность (ХПН III) [17].

Наряду с известными гемодинамическими свойствами Анг2 в последнее время обнаружены новые, позволяющие относиться к Анг2, как к многофункциональному цитокиноподобному фактору, вовлеченному в процессы воспаления. Предполагается, что именно провоспалительные эффекты Анг2 являются определяющими в патогенезе Анг2-индaуцированной ОПН в эксперименте. Анг2 регулирует синтез множества провоспалительных цитокинов как в почечном эпителии, так и в мононуклеарах крови [4, 14, 16]. Повышение уровня Анг2 приводит в тубулоинтерстициальной макрофагальной и лимфоцитарной инфильтрации, что наблюдали как при Анг2-индуцированной гипертензии, так и при гипертензии, вызванной попеременным клипированием сосудов обеих почек [13]. Иммуносупрессивная терапия снижала Анг2-индуцированное повреждение почек [13].

Некоторые исследователи отмечают потенциальную роль Анг2 в развитии ОПН [14]. Назначение ACEi, таких как каптоприл, предотвращает развитие ОПН, вызванной нефротоксичными рентгеноконтрастными препаратами [8]. Инактивация Анг2 защищала почки крыс от развития ишемической ОПН. На экспериментальной модели токсического поражения паренхимы почек препараты группы ACEi защищали от ОПН посредством снижения LPS-индуцированного синтеза IL-6 и TNFa [14]. Прямая нейтрализация Анг2 также имела защитный эффект при ОПН, вызванной раствором HgCl2 [20] и глицерином у лабораторных крыс in vivo. Аналогичный эффект на модели глицерининдуцированной ОПН получили, нейтрализуя TNFa.

В свете изложенного логично предположить, что супрессия Анг2 может быть одним из перспективных видов лечения, направленного на защиту почек при различных патологических состояниях. Назначение препаратов группы ACEi в настоящее время является основным, рутинно используемым методом лечения хронических протеинурических нефропатий [15, 17]. Однако препараты этой группы замедляют, а не останавливают прогрессию заболевания. У пациентов, которые неудовлетворительно отвечают на монотерапию препаратами ACEi, используют их комбинацию с блокаторами рецепторов Анг2 [1, 5, 18].

Приведенные данные показывают, что Анг-индуцированное поражение почек в основном связано с провоспалительными цитокиноподобными свойствами данного регуляторного пептида. Остается пока неясным, возможно ли с помощью нейтрализации Анг2 снизить продукцию провоспалительных цитокинов (что важно для достижения ренопротективного эффекта) и существует ли принципиальная возможность, блокировав Анг2, прерывать провоспалительные цитокиновые каскады, вызванные причинами, не связанными Анг2. Это и было целью нашего исследования.

Материалы и методы

Исследование проведено in vitro на клетках цельной человеческой крови здоровых доноров и а также периферических мононуклеарах. Забор крови производили в 16-20 ч у 14 здоровых добровольцев (5 женщин, 9 мужчин) в возрасте от 24 до 40 лет. Доноры не имели инфекционных и аутоиммунных заболеваний, а также в течение всего исследования и 2 недель до его начала воздерживались от физических тренировок и применения любых лекарственных препаратов и пищевых добавок. АД доноров было не ниже 100/60 мм. рт. ст. и не выше 130/80 мм. рт. ст.

Кровь с антикоагулянтом (гепарин, 20 ед./мл крови) разбавляли в 4 раза стерильной, подогретой до 37 єС средой RPMI 1640 (ISN Biomedicals Inc., USA) и вносили по 100 мкл в 96-луночный планшет (Greiner, Netherlands), куда затем добавляли 50 мкл стимулятора и 50 мкл другого агента или среды RPMI, когда их использование не требовалось (контроль). Окончательные концентрации реагентов в эксперименте были следующими: рекомбинантного человеческого ангиотензина 2 (Sigma, USA) - 250, 500 и 1000 нМ, LPS из E. coli (Difco, USA) - 20 нг/мл, IL-1b (Peprotech, USA) - 20 нг/мл, антагониста рецептора IL-1 (человеческий рекомбинантный IL-1Ra, Upjohn Co., USA) - 100 мкг/мл, IL-18-связывающего белка IL-18BP (Peprotech Inc., USA) - 50 нг/мл, препарата каптоприл (Sigma, USA) - 2 мМ, 1 мМ, 0,5 мМ. Все препараты цитокинов и их антагонистов были рекомбинантными человеческими белками. После инкубации культуры в увлажненном воздухе с 5 % CO2 при 37 °C в течение 10-12 ч кровь лизировали тритоном Х-100, супернатант собирали и анализировали на предмет содержания цитокинов методом жидкостной хемоэлектролюминесценции (ЭХЛ).

Метод жидкостной ЭХЛ [6]. Очищенные моноклональные мышиные антитела против измеряемого цитокина метили с помощью биотина (Igen Inc., USA). Другие мышиные антитела к тому же цитокину (R&D Systems, USA), реагирующее с другим эпитопом, метили хелатом рутения (II) по методике производителя измерительного прибора Origen Analyzer (Igen, USA). 25 мкл биотинилированного антитела (1 мг/мл в ЭХЛ-буфере (состав буфера: [6] инкубировали 30 мин при комнатной температуре с 25 мкл суспензии покрытых стрептавидином парамагнитных бус (1 мг/мл, Dynal, USA). Затем к смеси добавляли 25 мкл супернатанта, исследуемого на содержание цитокина или стандартных концентраций рекомбинантного цитокина. Наконец, добавляли 25 мкл рутенилированных антител (1 мкг/мл в ЭХЛ-буфере), пробирки встряхивали в течение 2 ч или ночи при комнатной температуре. Реакцию гасили добавлением 200 мкл фосфатного буфера и измеряли на приборе Origen Analyzer (Igen, USA).

Определение содержания Анг-2 в супернатанте производили иммуноферментным методом в соответствии с инструкцией производителя реагентов (Sigma, USA).

Статистическая обработка. Данные нормировали в соответствии с контролем. Ненормально распределенные данные анализировали с помощью непараметрического непарного теста Манна-Уитни. Группы сравнивали тестом ANOVA с использованием поправки Фишера. Статистическая значимость различий принималась в 95%-ном доверительном интервале. Статистический анализ проводили с использованием пакета прикладных программ StatviewTM 512+ (BrainPower, USA). Значения выражены как средняя арифметическая + стандартная ошибка средней (M + SE).

Если Вы хотите прочесть статью целиком, заказывайте компакт-диск,
на котором Вы найдете ВСЕ статьи ВСЕХ номеров журнала за 2005 и 2006 годы!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.


Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.