Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2007, № 4
|
Оригинальные статьи
|
Номер 4'2007
|
РОЛЬ ХОРИОНИЧЕСКОГО ГОНАДОТРОПИНА И ПОЛОВЫХ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ В МОДУЛЯЦИИ ВТОРИЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА, РЕАКЦИИ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЗАМЕДЛЕННОГО ТИПА И ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ
О.Л. Горбунова, С.В. Ширшев, Б.А. Бахметьев
Введение хорионического гонадотропина (ХГ) мышам-самкам породы Swiss стимулирует вторичный гуморальный иммунный ответ, не влияя на реакцию гиперчувствительности замедленного типа. ХГ повышает пул фагоцитирующих гранулоцитов периферической крови, угнетая фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов. Выявлена прямая корреляция между ХГ-зависимой стимуляцией фагоцитарной активности гранулоцитов периферической крови и повышением уровней прогестерона и эстрадиола, обусловленным гонадотропным эффектом гормона. Таким образом, установлено разнонаправленное действие ХГ, иммуностимулирующий вектор которого определяется половыми стероидными гормонами, а депрессивный - гонадотропином. Полученные результаты позволяют считать ХГ одним из важных факторов, усиливающих формирование гуморальных иммунных реакций и определяющих характерную для беременности иммунную составляющую фетопротекции. Гормонозависимая активация фагоцитов крови может служить одним из механизмов защиты плода от патогенов, определяя высокий уровень системы естественного иммунитета. (Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 4. С. 33-37.)
Ключевые слова: хорионический гонадотропин, половые стероидные гормоны, вторичный иммунный ответ, фагоцитарная активность.
Уникальность беременности заключается не только в преодолении трансплантатом (плодом) иммунных механизмов матери, но и в становлении новых эндокринных взаимодействий, обеспечивающих на качественно новом уровне нормальное сосуществование и развитие двух организмов. Наиболее важным гормоном с позиций сохранения и нормального развития беременности является хорионический гонадотропин (ХГ) [1, 2]. ХГ регулирует секрецию половых стероидов эстрадиола (E2) и прогестерона (Pr), изменяя при этом эндо-кринное зеркало и активно контролируя иммунные процессы [12].
Взаимоотношение иммунной системы матери с фетоплацентарным комплексом включает в себя не только первичный, но и вторичный иммунный ответ, который играет наиболее важную роль в регуляции беременности. Показано, что системные материнские ответы при беременности относятся преимущественно к гуморальным [10], поскольку клеточноопосредованные иммунные реакции могут оказывать цитотоксические эффекты на клетки фетоплацентарного комплекса, что, как правило, заканчивается резорбцией эмбриона [13]. Однако клеточноопосредованные иммунные ответы необходимы для противоинфекционной защиты. Поэтому ситуацию при беременности рассматривают как колеблющееся равновесие между двумя типами иммунных реакций, которое может смещаться в любом направлении [8].
Фагоцитирующие клетки занимают центральное место в иммунорегуляторных механизмах в период беременности, поскольку благодаря стероидному фону активно инфильтрируют ткани репродуктивного тракта и выступают в качестве мишени для ХГ [7]. В период гестации важную роль играют моноциты-макрофаги, которые определяют вид иммунного реагирования, сдвигая ответ Т-лимфоцитов в сторону гуморального иммунного ответа, определяющего трофическую функцию иммунной системы матери в отношении полуаллогенного плода. Показано, что ХГ участвует в контроле функ-циональной активности интактных моноцитов и гранулоцитов [11]. Однако, несмотря на очевидную иммуномодулирующую активность гормона в отношении функций фагоцитирующих клеток, его роль в регуляции фагоцитарной активности макрофагов и гранулоцитов в период одновременного развития вторичного гуморального иммунного ответа и клеточноопосредованных иммунных реакций не изучена. Учитывая, что чувствительность интактных фагоцитов к регуляторному воздействию гормонов отличается от антигенактивированных клеток, целью настоящей работы явилось изучение ХГ как возможного регулятора вторичного иммунного ответа, реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови и перитонеальных макрофагов.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на половозрелых мышах-самках породы Swiss массой 20-22 г. Животные были разделены на 3 группы: первая - контрольная, мышам инъецировали официнальный растворитель гормона. Двум другим группам вводили подкожно ХГ ("Profasi", Serano, Italy) через день в 2-х дозах, экстраполированных со средних концентраций гормона в сыворотке крови беременных женщин в I и II-III триместры, которые составили 200 и 20 МЕ/мышь, соответ-ственно [2].
Для индукции вторичного иммунного ответа животных интраперитонеально иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 1x108 клеток в 0,5 мл среды 199. Через 21 день реиммунизировали такой же дозой ЭБ. Спустя 4 суток после реиммунизации для проявления реакции ГЗТ мышам под апоневроз стопы вводили 5x107 ЭБ в объеме 0,05 мл. Затем, по истечении 24 часов одновременно оценивали: выраженность реакции ГЗТ по величине отека стопы в сравнении с интактной [17]; количество IgG-антителообразующих клеток (АОК) в селезенке непрямым методом Ерне в модификации [9]; титр специфических антител к ЭБ методом реакции прямой гемагглютинации [3]; фагоцитарную активность лейкоцитов модифицированным методом Каплина [4]. Для оценки гонадотропного действия ХГ в сыворотке крови мышей определяли уровни E2 ("Dia.Metra S.r.l.", Italy) и Pr (ООО "Хема-Медика", г. Москва) иммуноферментным методом. Учет результатов проводили с помощью планшетного анализатора "Bionhit BP 800" при длине волны 450 нм.
ХГ инъецировали через день на 17-е сутки после первой иммунизации вплоть до завершения эксперимента в объеме 0,2 мл, всего 5 инъекций.
Для выделения макрофагов перитонеальной полости после забоя животного в его брюшную полость при помощи шприца вводили холодную среду 199 в объеме 5 мл. После этого в течение нескольких минут брюшко животного осторожно массировали для того, чтобы клетки равномерно распределились во введенном объеме среды. Затем при помощи шприца забирали жидкость из брюшной полости в пробирки с антиадгезивным покрытием.
Фагоцитарную активность лейкоцитов цельной периферической крови, а также выделенных перитонеальных макрофагов регистрировали по поглощению формалинизированных ЭБ (ФЭБ). Концентрацию ФЭБ доводили до 1x108/мл. В пробирках смешивали 0,1 мл цельной гепаринизированной крови (или клеток перитонеальной полости) и 0,1 мл отмытых ФЭБ. Пробы инкубировали 20 мин при 37 °C. Затем содержимое пробирок ресуспендировали и готовили мазки, которые фиксировали метанолом и окрашивали по Романовскому - Гимза. Подсчет вели под иммерсией (объектив x90), просчитывали не менее 300 клеток в мазке. Рассчитывали следующие показатели: 1) процент фагоцитоза (ПФ) - количество фагоцитирующих клеток на 300 подсчитанных клеток; 2) индекс фагоцитоза (ФИ) - количество объектов фагоцитоза, которое приходится на один фагоцит; 3) фагоцитарное число (ФЧ) - количество объектов фагоцитоза, которое приходится на 1 из 300 подсчитанных фагоцитов. Указанные показатели рассчитывали отдельно для моноцитов, нейтрофилов, эозинофилов периферической крови и макрофагов перитонеальной полости [4].
Статистическую обработку полученных результатов проводили, применяя непараметрические методы статистики с использованием U-критерия Манна - Уитни, дополнительно проводя корреляционный анализ по Спирмену.
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Начата подписка на 2018 год!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
