Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2008, № 1
ВЛИЯНИЕ МИЕЛОПЕПТИДОВ НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ ЛИМФОЦИТОВИ ПРОДУКЦИЮ IL?1? И TNF? МОНОНУКЛЕАРАМИ, МОНОЦИТАМИ И НЕЙТРОФИЛАМИ
С.В. Гейн, Т.В. Гаврилова, В.А. Черешнев, М.В. Черешнева
Миелопептиды МП-1, МП-3, МП-5 и МП-6 угнетают пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови и снижают продукцию IL?1? мононуклеарами. МП-5, кроме того, снижает синтез TNF?. Подавление пролиферации и продукции IL?1? проявляется только в условиях межклеточной кооперации и только в стимулированных культурах. На пролиферативную активность очищенных лимфоцитов, а также на продукцию провоспалительных цитокинов фракциями моноцитов и нейтрофилов миелопептиды не влияют. (Цитокины и воспаление. 2008. Т. 7, № 1. С. 24-28.)
Нормальное функционирование иммунной системы обеспечивается сложной сетью взаимосвязанных сигналов, опосредуемых эндогенными информационными субстанциями [8]. Основная роль в реализации межклеточных взаимодействий в процессе развития иммунного ответа принадлежит цитокинам, представляющим собой полипептидные макромолекулы. Кроме цитокинов в регуляции процессов пролиферации и дифференцировки иммуноцитов участвуют и низкомолекулярные пептиды. В настоящее время описано три класса таких пептидов, участвующих в процессах иммунорегуляции, - нейропептиды, пептиды тимуса и пептиды костного мозга (миелопептиды) [6, 8].
Миелопептиды (МП) представляют собой группу биорегуляторных пептидов костномозгового происхождения, состоящую из шести отдельных фракций (МП-1, МП-2, МП-3, МП-4, МП-5, МП-6) и обладающую дифференцировочной и иммунорегуляторной активностью [9]. Широкий спектр биологической активности смеси МП реализуется за счет способности отдельных пептидных фракций направленно влиять на различные звенья иммуногенеза через взаимодействие с отдельными клеточными популяциями. В настоящее время известно, что МП-1 имеет центры специфического связывания на Т-лимфоцитах [5, 10], МП-3 модулирует функции клеток моноцитарно-макрофагального ряда [1], а МП-6 стимулирует дифференцировку перевиваемой клеточной линии миеломонобластного лейкоза человека HL-60 [7]. Однако, несмотря на направленные эффекты отдельных пептидных фракций, влияние МП на процессы взаимодействия отдельных клеточных популяций в ходе развития иммунных реакций изучено недостаточно.
Цель работы - исследовать влияния миелопептидов МП-1, МП-3, МП-5 и МП-6 на функциональную активность лимфоцитов и продукцию IL?1? и TNF? моноцитами и нейтрофилами периферической крови.
Материалы и методы
Лейкоциты периферической крови здоровых мужчин-добровольцев в возрасте от 22 до 30 лет культивировали с субоптимальной (2,5 мкг/мл) концентрацией фитогемагглютинина ("Sigma") в 96-луночных круглодонных планшетах. Каждая культура содержала 2???105 клеток в 0,2 мл полной питательной среды, состоявшей из среды 199, 10 мМ HEPES ("Sigma"), 2 мМ L?глутамина ("Sigma"), 100 мкг/мл гентамицина и 10% аутоплазмы. Культивирование осуществляли во влажной атмосфере с 5% СО2 при 37 °С в течение 72 ч. За 18 ч до окончания культивирования в каждую лунку вносили по 2 мкКи 3H-метилтимидина в объеме 10 мкл. Радиоактивность проб определяли на жидкостном сцинтилляционном счетчике "Guardian" (Wallac, Finland). МП-1 (Phe-Leu-Gly-Phe-Thr) и МП-3 (Leu-Val-Cys-Tyr-Pro-Gln) использовали в концентрациях 10-6, 10-8, 10-10 г/мл. МП-5 (Val-Val-Tyr-Pro-Asp) и МП-6 (Val-Asp-Pro-Pro) использовали в концентрации 10?-7 г/мл, выбор концентрации которых основывался на исследованиях, проведенных ранее [3, 4, 7]. Использованные в работе МП любезно предоставлены профессором А.А. Михайловой (Институт биоорганической химии РАН).
Выделение фракции мононуклеаров производили на градиенте плотности фиколла-верографина (??=?1,077 г/см3). Затем клеточную суспензию дважды отмывали, суспендировали в среде 199 и выдерживали в течение 1 ч при 4 °С для снятия активации, вызванной выделением. Разделение моноцитов и лимфоцитов производили методом адгезии на чашках Петри.
Выделение нейтрофилов производили путeм центрифугирования верхнего слоя плазмы с лейкоцитами на градиенте плотности фиколла-верографина (??=?1,068 г/см3) в течение 30 мин. Супернатант с мононуклеарными клетками удаляли, а осадок, содержащий нейтрофилы, собирали и дважды отмывали от фиколла в среде 199.
Культивирование мононуклеаров, нейтрофилов и моноцитов осуществляли в 24-луночных планшетах Costar (США) 1???106 клеток в 1 мл полной питательной среды 199 с добавлением 10 мМ HEPES ("Sigma"), 2 мМ L-глутамина ("Sigma"), 100 мкг/мл гентамицина и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ICN) во влажной атмосфере с 5% СО2 при 37 °С в течение 24 ч в присут-ствии липополисахарида (ЛПС, Escherichia coli O26:B6, "Sigma") в концентрации 0,1 мкг/мл. Супернатанты клеточных культур хранили в замороженном состоянии при -20 °С.
Определение концентрации цитокинов IL?1? и TNF? в супернатантах производили с использованием наборов ООО "Ци-токин" (Санкт-Петербург) в соответствии с методикой, предложенной производителем.
Все полученные данные представлены в виде средней и стандартной ошибки средней. Статистический анализ проводили с использованием парного t-критерия Стьюдента.
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
