E-mail: [email protected]
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'cytokines.ru', 2008, № 2

ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СВОЙСТВ ГЛИПРОЛИНОВ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИОСТРОГО ПЕРИТОНИТА У КРЫС

З.В. Бакаева, Г.Е. Самонина, Б.А. Умарова, Г.Н. Копылова, Е.Л. Гончарова, К.Е. Багликова

Ранее было показано, что глипролины - Pro-Gly-Pro (PGP), Pro-Gly (PG) и Gly-Pro (GP) - уменьшают образование и ускоряют заживление язв, вызванных аппликацией ледяной уксусной кислоты на слизистую оболочку желудка крыс. Учитывая, что ульцерогенез язвообразования включает в себя сильный воспалительный процесс, целью настоящей работы было исследовать противовоспалительные свой-ства этих пептидов на экспериментальной модели воспаления у животных. Острый перитонит вызывали у самцов белых беспородных крыс внутрибрюшинным введением 1%-го раствора уксусной кислоты, что сопровождалось экссудативной реакцией, выходом активных клеток крови в экссудат с преобладанием нейтрофильного компонента. Биохимический анализ крови показал изменение соотношения белковых фракций крови, характерное для воспаления. Предварительное внутрибрюшинное введение PGP, PG и GP в дозе 3,7 мкмоль/кг приводило к снижению в экссудате относительного количества нейтрофилов по сравнению с контролем и увеличению содержания эозинофилов и плазмоцитов. При этом уровень ?1- и ?2-глобулинов приближался к норме. Полученные результаты свидетельствуют о противовоспалительном действии РGP, PG и GP при экспериментальном перитоните, что может служить одним из механизмов противоязвенного эффекта глипролинов. (cytokines.ru. 2008. Т. 7, № 2. С. 28-32.)

Ключевые слова: глипролины, перитонит, экссудат, белки крови.

Короткие глицин- и пролинсодержащие пептиды - глипролины - известны своей высокой противоязвенной активностью [1, 15], которая зависит от последовательности аминокислот в молекуле и этиологии язвообразования [3]. Показано, что представители этого семейства, такие как трипептид Pro-Gly-Pro и его дипептидные метаболиты Pro-Gly и Gly-Pro уменьшают развитие и значительно ускоряют заживление ацетатной язвы [2]. Аппликация ледяной уксусной кислоты на серозную оболочку желудка по методу Окабе (1971) вызывает в месте повреждения разрушение тучных клеток [11], увеличение желатиназной активности [13], интенсивное перекисное окисление липидов и лизис клеточных мембран [8]. Эти процессы протекают на фоне нарушенного локального кровоснабжения, дефицита местных вазодилятаторов [14], что в совокупности приводит к формированию ацетатной язвы с глубоким гнойно-некротическим кратером в центре, часто с прободением. По статистическим данным у людей около 10?% язв желудка и двенадцатиперстной кишки осложняется перфорацией. Последнее сопровождается развитием перитонита и экссудативной реакцией. Экссудат, или выпот - жидкость, пропотевающая из мелких кровеносных сосудов, - содержит белок, лейкоциты, эритроциты, минеральные вещества, разрушенные клеточные элементы, часто микробы. Выпот образуется при любом воспалении, пропитывает окружающие ткани или скапливается в полостях тела, сдавливая окружающие органы и ткани, нарушая их функции. При прорыве из очага воспаления в ткани выпот способствует распространению инфекции. При рассасывании экссудата из брюшной полости остающийся на поверхности сероз-ных оболочек фибрин образует сращения (спайки). Надо отметить, что в наших предыдущих экспериментах у животных, получавших глипролиновые пептиды (ГП), в отличие от контроля, практически не наблюдалось прободений и спаек желудка с соседними органами [2].

Для глипролинов был показан широкий спектр влияний на различные параметры гомеостаза слизистой оболочки желудка (СОЖ) [1, 7], чем, вероятно, и обусловлен их высокий противоязвенный эффект. Особенно интересно, что ГП способны поддерживать адекватные условия микроциркуляции [4], предотвращать увеличение секреторной активности тучных клеток, тем самым ограничивая выброс провоспалительных факторов [9]. Известно, что вещества, уменьшающие воспаление в зоне язвенных дефектов, защищают СОЖ от острых повреждений и ускоряют заживление язв [12]. Предварительное введение Pro-Gly-Pro (PGP), Pro-Gly (PG) и Gly-Pro (GP) уменьшает экссудативную реакцию у крыс, вызванную внутрибрюшинным введением 40?%-ного раствора тиогликолата [10].

Мы провели гистоморфологическое исследование особенностей ускорения заживления ацетатной язвы глипролинами. Все исследуемые пептиды, по сравнению с контролем, в большей или меньшей степени снижают количество нейтрофилов, макрофагов и значительно увеличивают количество фибробластов в зоне язвенного дефекта, что характеризует снижение воспалительного процесса и повышение синтеза коллагена и других компонентов внеклеточного матрикса (неопубликованные данные). Полученные нами и данные литературных источников указывают на возможность проявления у глипролинов противовоспалительных свойств.

Целью настоящей работы было исследование противовоспалительного действия пептидов PGP, PG и GP на экспериментальной модели воспаления - ост-ром перитоните у животных.

Материалы и методы

Учитывая, что воспалительный процесс вызывает изменение проницаемости сосудов, клеточного и белкового состава крови, мы изучили влияние пептидов на экссудативную реакцию путем оценки степени (силы) экссудации, провели микроскопическое исследование брюшного экссудата и определили соотношение белковых фракций крови интактных животных и животных с перитонитом.

Острый перитонит вызывали у крыс массой 160-210 г (после 18-часового голодания) внутрибрюшинным введением 1%-ного раствора уксусной кислоты (1 мл/100 г массы тела). Исследуемые препараты PGP, PG и GP, синтезированные в Институте молекулярной генетики РАН, в дозе 3,7 мкмоль/кг и физиологический раствор вводили за 1 ч до введения раствора уксусной кислоты. Через 3 ч после введения уксусной кислоты у животных брали кровь из яремной вены для проведения биохимических исследований. Белковые фракции сыворотки крови определяли турбидиметрическим методом [5]. Принцип метода основан на том, что фосфатные растворы определенной концентрации осаждают с образованием очень мелкой взвеси различные белковые фракции сыворотки крови. По степени мутности растворов (устанавливаемой с помощью фотоэлектроколориметра) судят о концентрации белков в исследуемом материале. Затем животных усыпляли эфиром, вскрывали брюшную полость, собирали экссудат, замеряли его объем (в мл). В экссудат добавляли лимоннокислый натрий из расчета 1 г/л выпотной жидкости, чтобы предотвратить свертывание и захват в сгусток клеточных элементов [5]. Экссудат центрифугировали (центрифуга "Jonan", 3500 об/мин), из осадка готовили мазки, красили и сушили на аппарате Hema-Tec 2000 (Bayer, Germany). Окрашенные препараты просматривали на микроскопе (Zeiss Axiolab, объектив???100, окуляр???10) с иммерсионной системой (терпеновое масло). При микроскопическом исследовании подсчитывали количество нейтрофилов, лимфоцитов, плазмоцитов и эозинофилов на 100 клеток. Дополнительно считали содержание в мазке макрофагов и клеток мезотелия.

Эксперименты были проведены в соответствии с правилами приказа Минвуза № 742 от 13.11.84 "Об утверждении Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных".

Статистическую обработку результатов проводили при помощи компьютерной программы ANOVA с использованием LSD-теста.

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск cytokines.ru, 2008 год.