Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2008, № 2
|
Оригинальные статьи
|
Номер 2'2008
|
ВЛИЯНИЕ ХИРУРГИЧЕСКОГО СТРЕССА НА УРОВЕНЬ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ CD34+-ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК: АНАЛИЗ ВОЗМОЖНЫХ ФАКТОРОВ МОБИЛИЗАЦИИ
М.А. Алиев, Н.Н. Беляев, М.Р. Рысулы, Е.А. Ахметов, А.О. Сейдалин, Т.А. Супниязова, Ю.В. Перфильева, Р.Т. Тлеулиева, Б.А. Жумабаева, А.Т. Кодасбаев, К.C. Батталова, Ж.А. Сатыбалдиева
Изучали содержание гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) с фенотипом CD34+ в периферической крови больных, подвергнувшихся хирургическим операциям различной степени тяжести, в сочетании с оценкой уровня цитокинов, специфически влияющих на функциональную активность ГСК. Обследовано 27 больных с ишемической болезнью сердца. В опытной группе больные c множественными поражениями коронарных артерий подвергались аортокоронарному шунтированию с использованием венозных трансплантатов. В контрольной группе больным проводили стентирование коронарных артерий стентами. Процедура стентирования не приводила к увеличению уровня циркулирующих ГСК. В опытной группе к моменту выписки наблюдалось достоверное увеличение количества циркулирующих ГСК в 2,9 раза и 3,5-кратное увеличение концентрации SDF-1 в крови. Уровень GM-CSF, SCF и LIF практически не менялся у больных обеих групп на протяжении всего периода наблюдений. Уровень G-CSF после операции транзиторно повышался в 2,6 раз только в опытной группе. Предполагается, что значительная травматизация тканей, вызванная операцией аортокоронарного шунтирования, приводит уже в первый день к повышению продукции G-CSF, который, в свою очередь, стимулирует выброс ГСК из костного мозга. Совпадение максимума содержания ГСК в крови с максимумом продукции SDF-1 по времени свидетельствует о важности оси G-CSF - ГСК - поврежденная ткань - SDF-1 в регенерационном процессе в посттравматический период. (Цитокины и воспаление. 2008. Т. 7, № 2. С. 45-48.)
Обнаружение феномена пластичности у гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), инициировало взрыв исследовательского интереса к возможности восстановления поврежденных патологическим процессом или травмой тканей жизненно важных органов, таких как сердце, печень, легкие, спинной мозг. Ряд экспериментальных работ, проведенных на животных, доказал несомненность регенерационного потенциала ГСК, выделенных из костного мозга или мобилизованных из него с помощью колониестимулирующих факторов, и привел к появлению новой концепции восстановительной терапии поврежденных тканей, в основе которой лежит принцип соблюдения естественных механизмов клеточной репарации. Предполагаемый механизм заключается в том, что любая гибель клеток, связанная с травмой (в том числе, хирургической) или патологическим процессом, включая инфекционное и неинфекционное воспаление, инфаркт (например, вызванный ишемией), инсульт и т. п., приводит к выбросу в кровь из очага тканевого повреждения ряда факторов, обладающих мобилизующими свойствами в отношении ГСК костного мозга. ГСК покидают свою естественную нишу и перемещаются с кровотоком в область повреждения за счет хоуминга, обусловленного рядом факторов, образующихся в поврежденном участке. Наиболее изученным фактором хоуминга является хемокин SDF-1 (Stroma Derived Factor), к которому на ГСК имеются рецепторы типа CXCR4 [6]. В результате в очаге повреждения скапливаются ГСК, которые осуществляют репарацию поврежденной ткани. Однако экспериментальные находки нуждаются в подтверждении и, самое главное, в доказательстве существования феномена естественной клеточной репарации у человека. Важным этапом в этом процессе является изучение феномена мобилизации ГСК и механизмов хоуминга, инициированных тканевым повреждением, в частности, хирургической операцией.
Целью настоящего исследования явилось изучение содержания ГСК с фенотипом CD34+ в периферической крови больных, подвергшихся хирургическим операциям различной степени тяжести, в сочетании с оценкой уровня цитокинов, специфически влияющих на функциональную активность ГСК.
Материалы и методы
Обследовано 27 больных с ишемической болезнью сердца (ИБС) в возрасте от 35 до 55 лет. Больше половины больных (68?%) страдали ИБС в течение 1-5 лет. К моменту обследования 78?% больных были инвалидами I-III групп. Большинство пациентов (93?%) перенесли инфаркт миокарда. У восьми больных в анамнезе имелся 1 инфаркт миокарда, у трех больных - 2 и у трех больных - 3. У трех больных острый инфаркт миокарда осложнился аневризмой левого желудочка, с наличием в просвете тромба. Все больные до операции предъявляли жалобы на повторяющиеся боли за грудиной или в области сердца, купирующиеся приемом нитроглицерина. По функциональной классификации Нью-Йоркской ассоциации кардиологов (NYHA), 55,4?% больных были отнесены к III функциональному классу (ФК), 6,3?% - к IV ФК, столько же процентов больных имели нестабильную стенокардию, а 38,3?% - клинику II ФК.
Операции выполняли в условиях искусственного кровообращения, комбинированной фармакохолодовой кардиоплегии и общей гипотермии при температуре 28 °С. В случаях распространенного поражения коронарных артерий использовали методику антеградного и ретроградного введения кардиоплегического раствора.
Исследовали две группы больных, принципиально отличавшихся объемом хирургического вмешательства. В опытной группе, состоящей из 10 человек, больные подвергались аортокоронарному шунтированию. Среднее время искусственного кровообращения при этом составило 135 мин. Всем больным шунтировали от 2 до 5 коронарных артерий. При этом трем больным - в сочетании с аневризмэктомией и ремоделированием левого желудочка и одному больному - в сочетании с тромбэктомией. Маммарокоронарное шунтирование было произведено всем десяти больным. Аортокоронарное шунтирование с венозным трансплантатом осуществляли при множественности поражения коронарных артерий (шунтирование правой коронарной артерии у 5 больных, огибающей ветви левой коронарной артерии у 6 больных, ветви тупого края у 3 больных, диагональной ветви у 3 больных). В контрольной группе (17 человек) больным проводили стентирование коронарных артерий стентами (от 1 до 4) "CYPHER" фирмы "Johnson&Johnson".
Исследовали периферическую кровь больных, взятую за день до операции, на следующий день после операции и в момент выписки из стационара (на 8-10 день). Процент содержания CD34+ клеток определяли с помощью моноклональных антител, меченых фикоэритрином, используя стандартный протокол фирмы "BD Biosciences" (Germany) и проточный цитофлуориметр FACS Calibur. В качестве негативного дискриминирующего контроля использовали неспецифические меченые моноклональные антитела идентичного изотипа.
Цитокины определяли в сыворотке крови, используя коммерческие иммуноферментные тест-системы фирмы "IBL" (Germany) согласно рекомендациям фирмы-производителя. Определяли концентрацию LIF (leukemia inhibitory factor), SCF (stem cell factor), G-CSF (granulocyte colony stimulating factor), GM-CSF (granulocyte-monocyte colony stimulating factor). SDF-1 определяли в иммуноферментном анализе типа "сэндвич", используя стандартные методические подходы [1] по следующей схеме. Поликлональные антитела к SDF-1? ("PeproTech", USA) в концентрации 3 мкг/мл иммобилизовали на полистирольном планшете ("Nunc", Denmark) в карбонат-бикарбонатном буферном растворе в течение ночи при +4 °С. Блокирование неспецифического связывания проводили 0,5?% бычьим сывороточным альбумином и 0,1?% твином-20 в фосфатно-солевом буферном растворе в течение 1 ч при комнатной температуре. Образцы сыворотки крови или калибровочные растворы рекомбинантного SDF-1? ("PeproTech", USA) в концентрациях от 0,08 до 20 нг/мл вносили совместно с биотинилированными поликлональными антителами к SDF-1? (1 мкг/мл) и инкубировали 2 ч при комнатной температуре. Вторые антитела выявляли полимерным конъюгатом стрептавидин - пероксидаза ("Sigma", USA) в разведении 1:1000. В качестве субстрата использовали о-фенилендиамин ("Sigma", USA).
Полученные данные обрабатывали методами математической статистики, используя прикладную программу Microsoft Excel. Вычисляли среднюю арифметическую, среднюю квадратическую ошибку средней арифметической и достоверность различия средних (p), используя функцию ТТЕСТ.
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
