Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2008, № 4
|
Оригинальные статьи
|
Номер 4'2008
|
ЦИТОКИНОТЕРАПИЯ ИНТЕРЛЕЙКИНОМ 2В СПОНТАННОЙ МЫШИНОЙ МОДЕЛИ НЕПОЛНОЙ МАСТЭКТОМИИ
С.Г. Семушина, Ю.Ф.В. Тан, Е.В. Моисеева
Цитокинотерапия, в том числе интерлейкином 2 (IL-2), изначально предполагалась для лечения неоперабельных опухолей и применяется в клинике по сей день для преодоления вызванной хирургическим шоком иммуносупрессии. Неполная мастэктомия естественно возникающих аденокарцином мышей BLRB была использована для моделирования клинической ситуации, при которой иссечение опухоли в пределах здоровых тканей невозможно, а применение химио- или радиотерапии проблематично. IL-2 вводили однократно локально в остаточную опухолевую массу непосредственно во время проведения частичной мастэктомии, лечение каждой самки рассматривалось как индивидуальный клинический случай. Эффективность иммунотерапии оценивали по увеличению продолжительности и улучшению качества жизни самок-опухоленосителей. Для выявления прогностических факторов учитывали физиологический статус самок и особенности опухолевого роста. Показано, что инъекция IL-2 существенно снизила появление вторичных опухолей, что свидетельствовало о системном действии цитокинотерапии и об улучшении качества жизни реципиентов. Однако терапия IL-2 была эффективна только для особей с определенными характеристиками, а именно: девственных самок более молодого возраста с медленно растущими аденокарциномами с выраженным латентным периодом, особенно с предсуществующими геморрагическими кистами и патоморфологическими признаками спонтанного отторжения опухоли. Факторами, ограничивающими эффективность иммунотерапии, являлся пожилой возраст самок, наличие беременностей в анамнезе, быстрый рост опухоли и наличие муциновых кист в опухоли. (Цитокины и воспаление. 2008. Т. 7, № 4. С. 21-28.)
Несмотря на значительные успехи в лечении и изучении причин и особенностей рака молочной железы (РМЖ), смертность от него продолжает увеличиваться [1], обусловливая актуальность разработки новых и совершенствования существующих методов лечения, в том числе и иммунотерапевтических. Цитокинотерапия интерлейкином 2 (IL-2) применяется в клинической практике для лечения меланомы, рака почки и других солидных опухолей [4]. Эффективность этого вида иммунотерапии при РМЖ изучена недостаточно, результаты исследований неоднозначны [6]. Возникает необходимость поиска возможных прогностических факторов с целью предварительного отбора пациентов для успешного применения иммунотерапии IL-2 [8], для чего необходимы исследования на адекватных моделях РМЖ. Известно, что естественно возникающие, в том числе, и под действием хронических воспалительных процессов, опухоли молочных желез (ОМЖ) самок мышей BLRB-Rb(8.17)1Iem по патоморфологическим характеристикам адекватно отражают клиническую картину семейного РМЖ человека [13]. Было показано, что однократная перитуморальная (подкожная вокруг опухоли) инъекция IL-2 приводила к задержке роста ОМЖ у определенной части мышей-опухоленосителей [13].
В некоторых клинических случаях РМЖ по тем или иным причинам невозможно полное удаление опухолевой массы, что является причиной рецидивов и исключает возможность излечения пациента. Хирургическая операция сама по себе способна вызвать длительную иммуносупрессию, приводя к развитию септических осложнений, обеспечивая благоприятную почву для метастазирования [5, 13]. Это послужило основанием для клинического применения IL-2 в дооперационном периоде у больных раком желудка [3] и прямой кишки [2].
Поскольку на мышиной модели SL-2 лимфолейкоза интратуморальный (внутрь опухоли) способ введения IL-2 был признан более эффективным по сравнению с перитуморальным [7], мы предположили, что на спонтанной мышиной модели РМЖ однократная интратуморальная инъекция IL-2 при неполном иссечении опухолевой массы поможет снизить интенсивность роста остаточной первичной опухоли и/или предупредить появление вторичных, увеличив продолжительность жизни (ПЖ) реципиентов. Таким образом, целью исследования было проверить данную гипотезу и выявить возможные прогностические факторы, определяющие исход иммунотерапии, как связанные с самим реципиентом, так и с патоморфологическими особенностями роста опухоли.
Мы показали, что цитокинотерапия путем однократной инъекции IL-2 внутрь опухоли при проведении частичной мастэктомии способствует улучшению качества жизни всех реципиентов и выживанию только чувствительной к IL-2 популяции реципиентов, а именно, преимущественно молодых девственных самок с лаг-положительными медленно растущими опухолями.
Материалы и методы
Описание модели
Использовали самок мышей BLRB-Rb(8.17)1Iem (BLRB) [14] с высокой частотой возникновения спонтанного РМЖ с возможным участием экзогенного MMTV-ретровируса, обнаруженного у них в лейкоцитарной фракции крови. Частота возникновения опухолей молочных желез (ОМЖ) близка к 100 % для многорожавших самок BLRB при среднем возрасте около 11 месяцев на момент обнаружения первой опухоли. У каждой третьей самки развивается более одной опухоли [13] в соответствии с расположением молочных желез (рис. 1а).
Дизайн эксперимента
До проведения операции самок с опухолями распределяли в контрольную и опытную группы попарно с учетом физиологических характеристик (возраст, гормональный статус: рожавшие/нерожавшие) и особенностей опухолевого роста (количество локализаций, наличие/отсутствие латентного периода, начальный размер, динамика роста). Пальпируемые опухоли размером менее 4 мм в течение, по крайней мере, двух недель (с выраженным латентным периодом), называли лаг-положительными (лаг+). Опухоли размером более 4 мм уже при первом обнаружении называли лаг-отрицательными (лаг-). Измерение размера опухолей производили еженедельно путем вычисления среднего диаметра индивидуальной опухоли (СДО) по трем взаимно перпендикулярным параметрам [13]. Было прооперировано 20 самок (10 контрольных и 10 опытных). Однако две самки экспериментальной группы были исключены из рассмотрения вследствие обнаружения у них сопутствующего лимфолейкоза. Хирургические операции проводили на наркотизированных животных. При наличии у самки одной опухоли проводили частичное удаление ОМЖ - неполную мастэктомию (НМЭ), иссекая 50-80% опухолевой массы (рис. 1б). В остаток опухоли самкам экспериментальной группы (n=8) инъецировали 0,2 мл IL-2 (Chiron, Амстердам) в физиологическом растворе в дозе 1???106 МЕ на мышь. Самкам контрольной группы (n=10) вводили аналогичным образом соответствующее количество физиологического раствора. При наличии у самок нескольких опухолей (n=2) операбельную ОМЖ удаляли полностью, а в оставшуюся неоперабельную опухоль самке экспериментальной группы интратуморально вводили IL-2, самке контрольной группы вводили физиологический раствор. Операционную рану закрывали непрерывным швом.
Регистрация и оценка параметров
Эффективность локальной однократной инъекции IL-2 при НМЭ оценивали по улучшению качества жизни (замедлению роста остаточных опухолевых масс и отсутствию вторичных ОМЖ) и выживанию мышей в экспериментальной группе по сравнению с контролем. Учитывали следующие временные параметры: возраст самки на момент возникновения опухоли, ПЖ самки с момента обнаружения опухоли до операции и после операции до момента гибели, а также полную ПЖ. После проведения операции у самок еженедельно оценивали физическое состояние, измеряли массу тела, размеры остаточной опухолевой массы, отмечали появление вторичных опухолей и время гибели самок. При размере опухоли более 15 мм и потере веса более 20% самок подвергали эвтаназии. При проведении мониторинга роста остаточных опухолевых масс рассчитывали прирост СДО опухоли в конце жизни самки, который вычисляли по формуле (СДОк-СДОнмэ/СДОнмэ)*100%, где СДОк - конечный и СДОнмэ - диаметр опухоли на момент НМЭ. Затем на основании этого параметра рассчитывали скорость роста опухоли после НМЭ как прирост СДО в неделю.
Патоморфологический анализ
Образцы иссеченных опухолей фиксировали в 4%-ном растворе нейтрального формалина. Для проведения классификации опухолей, визуализации геморрагических участков опухоли и выявления эозинофильных гранулоцитов (Эо) в лейкоцитарном инфильтрате опухоли (ЛИО) использовали стандартную окраску гематоксилином-эозином по Майеру. Для визуализации секреторной активности клеток и выявления макрофагов (Мф) в ЛИО использовали окраску по Шиффу. Опухоли молочных желез классифицировали по разработанной ранее схеме [12, 13].
Статистическую значимость различий в значениях параметров определяли с помощью непараметрического U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2006 год.
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2007 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
