197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2013, № 3

Особенности цитокинпродуцирующей способности мононуклеарных клеток периферической крови при метаболическом синдроме

Л.С. Литвинова, Е.В. Кириенкова, Н.Д. Газатова, П.А. Затолокин, М.А. Василенко, Н.Н. Аксенова, А.С. Симбирцев

Исследование цитокинпродуцирующей способности мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови проведено у 44 пациентов с метаболическим синдромом (МС) (23 мужчин и 21 женщины в возрасте от 48 до 64 лет, индекс массы тела (ИМТ) — от 35,6 до 42,4). Методом иммуноферментного анализа в супернатантах клеточных культур оценена продукция МНК про- и антивоспалительных цитокинов (TNFα, IFNγ, IL-1, IL-2, IL-6, IL-4, IL-8, IL-10 и IL-17).Результаты проведенного исследования свидетельствуют о повышенной способности МНК спонтанно продуцировать цитокины, обладающие провоспалительными эффектами (TNFα, IL-1, IL-6, IL-8 и IL-17), при относительно низкой степени их митоген-индуцированной секреции. Данный факт может быть обусловлен снижением резервной способности МНК продуцировать медиаторы воспаления вследствие хронического течения заболевания. Функциональная неполноценность МНК больных МС также подтверждается пониженной способностью (спонтанной и ФГА-индуцированной) секретировать IL-2 — основной фактор роста и дифференцировки Т-лимфоцитов. Полученные результаты свидетельствуют о значимом изменении функциональной активности МНК на фоне хронического воспаления при МС.(Цитокины и воспаление. 2013. Т. 12. № 3. С. 62–66.)

Ключевые слова: мононуклеары крови, метаболический синдром, цитокины.

Метаболический синдром (МС) представляет собой неуклонно прогрессирующее заболевание, включающее абдоминальное ожирение, инсулинорезистентность (ИР), гипергликемию, дислипидемию, артериальную гипертонию (АГ), нарушение системы гемостаза, хроническое субклиническое воспаление. Доказано, что активация провоспалительных механизмов, характерная для МС, является вторичной по отношению к ожирению [16]. Так, продукты клеточной деградации, образующиеся в процессе гибели жировых клеток, увеличение уровня неэстерифицированных жирных кислот вследствие активного липолиза, повышение образования фактора HIF-1 (гипокси-индуцированного фактора-1) в условиях циркуляторной гипоксии жировой ткани приводят к повышенной продукции жировыми клетками (адипоцитами и макрофагами, инфильтрирующими жировую ткань), провоспалительных белков и цитокинов — главных инициаторов воспалительного процесса [20]. Увеличение продукции медиаторов воспаления во многих тканях, включая печень, поджелудочную железу, скелетные мышцы, жировую ткань, наблюдается у тучных людей и определяется как субклиническое или метаболическое воспаление [17]. Основным элементом такого воспаления является клеточная инфильтрация тканей, для которой характерно увеличение числа провоспалительных макрофагов (M1-типа (классические макрофаги)), Т-хелперов 1-го типа (Th1), Th17 и CD8⁺-Т-клеток) и уменьшение содержания M2-макрофагов (альтернативно активированных, способствующих ангиогенезу, ремоделированию и репарации тканей), Т-регуляторных (Тreg) и Th2-клеток [11, 13, 18, 19]. В связи с этим становится очевидным, что иммунокомпетентные клетки являются своеобразными дирижерами происходящих в организме воспалительных реакций при ожирении. Посредством прямого межклеточного контакта и продукции цитокинов мононуклеарные клетки (МНК) способны стимулировать или ингибировать функциональную активность других иммунокомпетентных клеток.

Цель исследования состояла в исследовании способности МНК периферической крови больных МС продуцировать про- и антивоспалительные цитокины.

Материалы и методы

Сформированная группа исследования состояла из 44 пациентов (23 мужчин и 21 женщины в возрасте от 48 до 64 лет) с МС, поступивших на лечение в Областную клиническую больницу г. Калининграда. Исследования проводили у больных МС до проведения им коррекционных мероприятий (индекс массы тела (ИМТ) — от 35,6 до 42,4 кг/м²). Больные с МС находились на лечении в отделении реконструктивной и пластической хирургии областной клинической больницы г. Диагноз МС устанавливали согласно классификации ВОЗ (1998). Группа сравнения включала в себя 25 здоровых доноров — жителей г. Калининграда с нормальным ИМТ (от 18,9 до 24,9 кг/м²). Эта группа была сопоставима с группой исследования по возрастным и гендерным характеристикам. Венозную гепаринизированную кровь (25 ЕД/мл) выдерживали при 37 ºC в течение 40–60 мин для отделения лейкоцитов от эритроцитов. Лейкоциты наслаивали на градиент Ficoll-Paque («Pharmacia», Sweden) (1,077 г/см³) в соотношении 1:1 и центрифугировали при 1500 об./мин 45 мин. Образовавшееся кольцо из МНК собирали автоматической пипеткой в центрифужную пробирку. Далее клетки трижды отмывали средой RPMI-1640 («Sigma», USA), центрифугируя их каждый раз в течение 10 мин при 1500 об./мин и ресуспендируя в среде RPMI-1640 [8].

Подсчет клеточности и определение жизнеспособности клеток проводили с помощью автоматического счетчика клеток (Countess Automated Cell Counter, «Invitrogen», USA) c использованием 0,4% красителя трипанового синего (Trypan Blue stain 0,4 %, «Invitrogen», USA). Доля живых клеток, не содержащих краситель, составляла обычно не менее 95 %. Для получения культуральных супернатантов МНК культивировали в плоскодонном 24-луночном планшете в количестве 2,0 × 10⁶ на лунку в RPMI-1640, содержащей 0,3 мг/мл L-глутамина, («Sigma», USA), 5 × 10^-5 M меркаптоэтанола («Acros Organics», USA) и 30 мкг/мл гентамицина в течение 24 ч при температуре 37 ºC во влажной атмосфере с 5 % СО₂. Для стимуляции секреторной активности клеток в пробы вносили 5 мкг/мл фитогемагглютинина (ФГА) («Sigma», USA). Содержание цитокинов (TNFα, IFNγ, IL-1, IL-2, IL-6, IL-4, IL-8, IL-10 и IL-17) в супернатантах определяли твердофазным иммуноферментным сэндвич-методом (ELISA). Процедуру проводили согласно инструкциям компании-производителя использованных тест-систем (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская обл.).

Проверку нормальности распределения количественных показателей проводили с использованием критерия Колмогорова — Смирнова. При соответствии нормальному закону распределения признака в исследуемых выборках проверку гипотезы о равенстве средних выборочных величин осуществляли с использованием t-критерия Стьюдента. В случае отсутствия согласия данных с нормальным распределением для оценки различий между зависимыми выборками применяли непараметрический критерий Вилкоксона. С помощью рангового критерия Манна — Уитни оценивали достоверность различий независимых выборок. Наличие связи между изучаемыми показателями проводили с использованием корреляционного анализа по методу Спирмена. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!


Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.