Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2015, № 2
|
Оригинальные статьи
|
Номер 2'2015
|
Цитокины в ободочной кишке у самцов мышей C57BL/6 при остром и хроническом декстраниндуцированном колите
Н.А. Золотова, М.Е. Диатроптов, М.Б. Чернышева, Д.Н. Хочанский, С.О. Кирюхин, Е.А. Постовалова
Охарактеризованы изменения уровней цитокинов в стенке ободочной кишки при экспериментальном остром (7-е и 9-е сутки) и хроническом (28-е сутки) колите, индуцированном 1% декстрансульфатом натрия (ДСН) в течение 5 дней у половозрелых самцов C57Bl/6. На 7-е и 9-е сутки в ободочной кишке наблюдалась картина острого воспаления: нарушения целостности эпителиальной выстилки, поверхностные и обширные эрозии, крипт-абсцессы; выраженная воспалительная инфильтрация собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы из нейтрофилов, гистиоцитов и лимфоцитов; отек подслизистой основы и расширение лимфатических сосудов. Уровни IL-2, IL-4, IL-6, IL-17 и IFNγ статистически значимо снижались по сравнению с контролем. При хроническом колите в ободочной кишке наблюдалось ремоделирование слизистой оболочки, расширение крипт, заполнение их слизью, увеличение расстояния между криптами, выраженная воспалительная инфильтрация слизистой оболочки плазмоцитами, гистиоцитами и единичными нейтрофилами; увеличение числа лимфоидных узелков. Уровни IL-2, IL-4, IL-6, IL-17 и IFNγ не отличались от контрольных значений. (Цитокины и воспаление. 2015. Т. 14. № 2. С. 70–76.)
Ключевые слова: цитокины, экспериментальный колит, декстрансульфат натрия, мыши C57Bl/6.
Язвенный колит и болезнь Крона являются двумя основными формами воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК), представляющих собой одну из нерешенных проблем современной гастроэнтерологии. ВЗК относительно широко распространены среди населения, их этиология неизвестна, патогенез не вполне ясен и методы лечения недостаточно эффективны [1, 22].
По тяжести течения, частоте осложнений и летальности ВЗК во всем мире занимают одно из ведущих мест в структуре болезней желудочно-кишечного тракта [1]. Язвенный колит — воспалительное заболевание толстой кишки с рецидивирующим течением, поражающее слизистую оболочку прямой и других отделов толстой кишки. Клинически это заболевание проявляется диареей, синдромом нарушенного всасывания, снижением массы тела, ректальными кровотечениями, болями в животе [1]. Частота встречаемости язвенного колита в структуре заболеваний желудочно-кишечного тракта составляет 65,2 % [22]. У 20 % больных язвенным колитом развивается колоректальный рак [11].
Для изучения патогенеза и разработки новых методов лечения ВЗК создан ряд моделей на животных. В настоящее время исследователями широко используется модель колита, индуцированного декстрансульфатом натрия (ДСН), предложенная Okayasu I.и др. [16]. Механизм повреждающего и провоспалительного действия ДСН недостаточно изучен. Показано, что ДСН оказывает прямой цитотоксический эффект, вызывает нарушение проницаемости эпителиального барьера, транслокацию микрофлоры, воспалительный процесс с развитием эрозий и язв [9, 15]. Эта модель наиболее адекватна язвенному колиту у человека, воспроизводится в 100 % случаев и позволяет моделировать как острое, так и хроническое воспаление толстой кишки. Развитие воспалительного процесса при ДСН-индуцированном колите регулируется медиаторами воспаления, цитокинами, молекулами адгезии. В литературе представлены многочисленные данные об изменении уровней различных цитокинов при ДСН-индуцированном колите [3, 4, 6, 7, 10, 13, 17–21]. Однако эти данные часто противоречивы, что, вероятно, связано с использованием различных линий животных, концентраций ДСН, сроков эксперимента, методов определения уровней цитокинов. Кроме того, большая часть статей посвящена только острому колиту.
Целью работы было изучение изменения уровней цитокинов в стенке ободочной кишки при экспериментальном остром и хроническом колите, индуцированном ДСН у мышей линии C57Bl/6.
Материалы и методы
Исследование проводили на половозрелых самцах мышей линии C57Bl/6 (возраст 8–10 недель) и массой тела 21–28 г (n=80; Филиал «Столбовая» ГУ НЦБМТ РАМН, Россия). Мышей содержали в открытой системе при температуре 18–22 °С и естественном освещении, они получали в свободном доступе воду и комбикорм ПК-120-1 (сертификат соответствия № POCC RU.nO81.B00113, ГОСТ P50258-92).
Колит моделировали с помощью замены в поилках питьевой воды на 1 % раствор ДСН (Dextran sulfate sodium salt, Mr ~40,000, «AppliChem») в течение 5 дней, далее животные получали обычную питьевую воду. Мышей выводили из эксперимента на 7-е (n=15), 9-е (n=18) сутки (острый колит), и 28-е сутки (n=17) (хронический колит) путем цервикальной дислокации под эфирным наркозом. Контрольная группа (n=20) животных на протяжении всего эксперимента получала обычную питьевую воду. При моделировании колита с 5 по 22 день эксперимента погибло 10 мышей.
Определяли массу тела мышей перед началом эксперимента и при выведении из него. При вскрытии животных измеряли длину ободочной кишки. Для гистологического исследования ободочную кишку извлекали из брюшной полости, разрезали по брыжейке, промывали забуференным физиологическим раствором (ЗФР), расправляли на миллипоровом фильтре, разделяли на 3 отдела (проксимальный, медиальный, дистальный) и помещали в фиксатор Буэна. После гистологической проводки кусочки заливали в парафин, изготавливали срезы толщиной 5 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином.
Для иммуноферментного метода (ИФМ) ободочную кишку извлекали из брюшной полости, выделяли медиальный отдел, вскрывали его продольно, промывали ЗФР, разделяли продольно на 2 части, одну часть помещали в 1 мл ЗФР при температуре 4 ○С. Далее ткань гомогенизировали (гомогенизатор «TissueLyser LT», Qiagen) 10 минут при 40 Гц, центрифугировали (центрифуга вортекс «CM-70M», ELMI) 15 минут при 9000 об/мин. Супернатант замораживали при -70 ○С и хранили не более 3 месяцев. Проводили определение концентраций интерлейкинов IL-2, IL-4, IL-6, IL-17 и интерферона γ (IFNγ) в гомогенате ободочной кишки с помощью ИФМ и наборов фирмы «eBioscience» согласно инструкции. Концентрации цитокинов нормировали на общее содержание белка в каждой пробе, определяемое УФ-методом с помощью спектрофотометра «BioSpec-nano» (Shimadzu).
Проводили статистическую обработку данных методами непараметрической статистики. Результаты представляли в виде медианы и межквартильного размаха (Me (0,25L;0,75U)). Сравнение результатов между группами проводили по U-критерию Манна — Уитни и с помощью дисперсионного анализа Крускала — Уоллиса. Для статистической обработки данных и построения диаграмм использовали пакеты «Statistica 8.0» (StatSoft) и «Excel MS Office 2010» (Microsoft).
Результаты и обсуждение
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Начата подписка на 2016 год!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
