197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, д. 12,
Институт экспериментальной медицины РАМН
Тел.: (812) 543 52 14, +7 921 984 11 30, +7 921 909 55 49
Факс: (812) 543 52 14
E-mail:
Web: cytokines.ru

  

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Журнал 'Цитокины и воспаление', 2015, № 2

Повышение противовирусной активности интерферона 1 типа при усилении сигнала клеточного рецептора

Е.Н. Свентицкий, И.А. Помыткин, Ю.В. Тяготин, Т.С. Егорова

Интерфероны (IFN) проявляют противовирусную эффективность, воздействуя на клеточный рецептор, что ведет к фосфорилированию тирозинов и активации латентных цитоплазматических STAT-факторов. Протеинтирозинфосфатазы (ПТФ), присутствующие в клетках, осуществляют отрицательную регуляцию каскада передачи сигнала IFN. Физиологическим ингибитором редокс-зависимых белков ПТФ является перекись водорода (Н₂О₂). В настоящей работе с использованием клеток гепатомы печени человека HepG2 показано, что IFN ингибирует активность ПТФ, генерируя митохондриальную Н₂О₂, и ключевую роль в этом процессе играет сукцинатдегидрогеназа (СДГ). Продемонстрировано in vitro, что в присутствии сукцината, являющегося субстратом СДГ, усиливается сигнал IFN, дополнительно ингибируются ПТФ и, соответственно, увеличивается противовирусная активность IFN. Полученные результаты могут быть использованы при повышении эффективности лекарственных средств и снижении резистентности к терапии вирусных инфекций интерферонами. (Цитокины и воспаление. 2015. Т. 14. № 2. С. 88–91.)

Ключевые слова: клеточные рецепторы интерферона, митохондриальная перекись водорода.

Известно, что интерфероны (IFN) 1-го типа проявляют противовирусную активность, связываясь с расположенным на поверхности клеточной мембраны рецептором и запуская каскад Jak-STAT передачи сигнала, приводящий к активации транскрипции интерферон-регулируемых генов и синтезу противовирусных белков. Внутриклеточные протеинтирозинфосфатазы (ПТФ) являются негативными регуляторами Jak–STAT каскада, дефосфорилируя киназы Jak-1 и Tyk-2, а также локализованные в клеточном ядре фосфорилированные Stat-белки [2, 6, 10].

Целью данного исследования было изучение возможности активации каскада передачи сигнала рецептора IFN 1-го типа при ингибировании ПТФ для повышения противовирусной активности IFN, что представляется особенно важным в случаях резистентности вирусов (гепатита С, Эбола, аденовируса и др.) к IFN [4].

Материалы и методы

Рекомбинантный интерферон альфа2а человека «Интераль» был приготовлен на опытно-экспериментальном участке ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург. Культура клеток гепатомы печени человека HepG2 получена из коллекции клеточных культур Института цитологии РАН (Санкт-Петербург).

Клетки выращивали на среде DMEM с добавлением 10–15 % телячьей фетальной сыворотки. Высев клеток на планшеты проводили в плотности 3×10⁵ клеток/мл по 100 мкл на ячейку. Жизнеспособность клеток контролировали с использованием красителя трипановый синий.

Общую активность ПТФ в клетках HepG2 оценивали по скорости выделения неорганического фосфата из фосфотирозина с использованием набора фирмы «Sigma» так, как это описано производителем. Концентрацию свободного фосфата определяли с помощью калибровочной кривой по интенсивности окрашивания клеток (λ=595 нм) на спектрофотометре фирмы «BioRad Laboratories».

Содержание фосфорилированного белка Stat1 в клетках HepG2 определяли радиометрически по включению [³²P] после добавления 3 пкг/мл IFN или смеси 3 пкг/мл IFN с 10 мкМ сукцината натрия (сукцинат). Авторадиографию выполняли согласно [11].

Выживаемость клеток HepG2 в присутствии вируса везикулярного стоматита после добавления в среду IFN и сукцината оценивали в тесте окрашивания солью тетразолия МТТ (ДиМетилТиазолил дифенилТетразолия бромид) [8]. В опыте с дезоксихолевой кислотой ее вносили за 2 часа до остальных добавок, чтобы заранее вызвать резистентность к интерферону. Интенсивность окраски клеток определяли при длине волны 595 нм.

Сукцинат натрия, дезоксихолиевая кислота, каталаза, малонат были приобретены в «Sigma-Aldrich Corporation».

Результаты представляли как средние значения ± стандартные отклонения результатов измерений, полученных в n опытах. Достоверность различий полученных результатов оценивали с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!

Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья

Начата подписка на 2016 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.