Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2016, № 1
|
Оригинальные статьи
|
Номер 1'2016
|
Матриксная металлопротеиназа 1-го типа в крови больных ишемической болезнью сердца и в атеросклеротических поражениях у человека
П.В. Пигаревский, С.В. Мальцева, А.Е. Татаринов, А.С. Иванова, Д.А. Танянский, В.А. Снегова, Н.В. Чивикова
Иммунобиохимический анализ содержания матриксной металлопротеиназы 1-го типа (ММР-1) в сыворотке крови пациентов с различным формами течения ишемической болезни сердца и иммуногистохимическое исследование атеросклеротических поражений аорты человека позволили установить, что в основе механизма повреждения фиброзной покрышки нестабильной бляшки может лежать увеличение ММР-1 в периферической крови и активная продукция макрофагами этого фермента в стенке магистральных сосудов. ММР-1 является мощным протеолитическим ферментом, вызывающим деградацию внеклеточного матрикса (эластических и коллагеновых волокон) и снижающим численность гладкомышечных клеток в стенке аорты человека. В результате наблюдается резкое снижение прочности покрышки атеросклеротической бляшки и ее дестабилизация. (Цитокины и воспаление. 2016. Т. 15. № 1. С. 61–65.)
Ключевые слова: атеросклероз, макрофаги, матриксная металлопротеиназа 1-го типа.
К настоящему времени в литературе накопилось достаточное количество фактов, свидетельствующих о том, что нестабильные, отличающиеся прогрессирующим ростом атеросклеротические поражения артерий человека являются причиной абсолютного большинства острых клинических осложнений атеросклероза и ишемической болезни сердца (ИБС) [1, 2, 3, 9]. Исследование этих поражений — одно из самых молодых и малоизученных направлений современной патологии. Поэтому выяснение причин и механизмов дестабилизации атеросклеротических бляшек при ИБС, а также выявление предикторов и клинических маркеров такой дестабилизации может позволить разработать меры по предупреждению и лечению острого коронарного синдрома (ОКС).
В ранее проведенных исследованиях выявлено, что развитию иммунного воспаления в сосудистой стенке при атеросклерозе, приводящему к эрозии и дегенеративным изменениям покрышки бляшки с последующим ее разрывом и образованием тромба (дестабилизации бляшки), способствуют макрофаги, вызывая деградацию внеклеточного матрикса с помощью сильных протеолитических ферментов — матриксных металлопротеиназ (MMP) [8, 9]. MMP удалось определить в циркулирующей крови у пациентов, страдавших различными вариантами ОКС, и показать достоверное повышение их уровня у больных с нестабильной стенокардией, по сравнению со здоровыми людьми [4]. Известно, что повышенный уровень некоторых металлопротеиназ имеет прогностическое значение в отношении развития рестенозов. Часть исследователей полагает, что уровень MMP в крови может выступать в качестве маркера воспаления при развитии ОКС [7].
Определено несколько различных вариантов MMP: 1, 2, 7, 9, 12, экспрессируемых макрофагами в нестабильных бляшках [3–5]. Не исключено, что разрушение белков внеклеточного матрикса сосудистой стенки MMP способно приводить к нестабильности атеросклеротической бляшки, ее разрыву с появлением таких клинических симптомов как нестабильная стенокардия, инфаркт миокарда и инсульт [6].
В литературе отсутствуют работы, в которых проводился бы комплексный сравнительный иммунобиохимический и иммуногистохимический анализ содержания MMP 1-го типа (ММР-1) в крови больных с различными формами течения ИБС и в различных зонах нестабильных и стабильных атеросклеротических бляшек у человека с одновременным изучением состояния эластико-коллагенового каркаса атеросклеротических поражений.
Цель исследованиязаключалась в сравнительноманализе содержания ММР-1 в сыворотке крови пациентов с различным формами течения ИБС и в разных типах атеросклеротических поражений в сосудистой стенке человека.
Материалы и методы
Для определения количественного содержания ММР-1 материалом исследования служили 30 образцов крови, взятые у пациентов, проходивших обследование в клинике ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины».
Для сравнительного анализа значений концентрации ММР-1 в крови больных пациенты были разделены на три группы:1-я — стабильное течение атеросклероза; 2-я — прогрессирующее течение атеросклероза; 0-я — относительно здоровая группа пациентов.
В основе такой классификации лежали следующие критерии: наличие/отсутствие/повторные случаи инфарктов и инсультов в анамнезе пациентов; наличие, по данным дуплексного ангиосканирования сосудов шеи и головы, атеросклеротических бляшек, обтурирующих просвет сосуда (увеличение их размеров в течение года, прогрессирование гемодинамически значимых стенозов); наличие/отсутствие гиперхолестеренемии (семейной гиперлипедемии), артериальной гипертензии. Кроме этого, при отборе групп учитывались такие показатели, как: возраст, индекс массы тела, наличие вредных привычек (курение, злоупотребление алкоголем), сахарного диабета и других эндокринных заболеваний.
Концентрацию ММР-1 в сыворотке крови определяли с использованием сэндвич-варианта иммуноферментного анализа («Human MMP-1 Elisa Kit», «Sigma-Aldrich», США) и планшет-ридера для ИФА ELX 800 («Biotek»). В обработке данных использовали статистический модуль Excel с установлением достоверности различий среднего (M) и ошибки среднего (m) по Стьюденту против контрольной группы пациентов (0-я группа).
При исследовании поражений сосудистой стенки материалом послужили 12 аутопсий, полученных от мужчин в возрасте 63±8 лет, умерших от острой сердечно-сосудистой недостаточности атеросклеротической этиологии. Обязательным условием для отбора материала являлось отсутствие тяжелых, сопутствующих заболеваний, способных оказывать воздействие на иммунологическую реактивность.
Изучали сегменты аорты (из района дуги, грудного и брюшного отделов), всего 54 образца ткани.
Иссеченные кусочки фиксировали в 4 % забуференном параформальдегиде (pH 7,4). Иммуноморфологическое и микроскопическое исследование проводили на парафиновых и криостатных срезах толщиной 4–6 мкм.
Для верификации типов атеросклеротических поражений, с целью отбора нестабильных, обладающих признаками прогрессирующего роста бляшек, проводили окрашивание препаратов на выявление липидов красителем Oil Red O («Dako»).
Для определения в нестабильных и стабильных атеросклеротических поражениях наличия ММР-1 и макрофагов проводили иммуногистохимический анализ двухступенчатым стрептавидин-биотиновым методом (Cell & Tissue Staining Kit, HRP-DAB System, «R&D Systems»). Использовали моноклональные антитела к MMP-1 (клон 36665, 50 мкг/мл, «R&D Systems»), макрофагам (CD68, клон KP1, 50 мкг/мл, «Dako»). Докрашивание ядер осуществляли метиловым зеленым (готовый раствор Methyl Green «Dako»).
С целью выявления особенностей эластико-коллагенового каркаса в различных типах атеросклеротических поражений сосудистой стенки проводили селективное окрашивание образцов ткани по методу Вейгерта — Ван Гизона (экспресс-метод «Bio Optica»). Специфичность метода позволяла дифференцировать различные тканевые структуры: коллагеновые волокна (различные оттенки красного), эластические волокна (от фиолетового до коричневого), ядра (окрашены почти черным), эритроциты, матрикс (желтые).
Полученные препараты исследовали в световом микроскопе «Leica» DM 2500. Микрофотографии получали с использованием цифровой фотокамеры «Leica» DFC 420 и компьютерной программы «Leica Application Suit Version 3.4.0».
Результаты и обсуждение
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Начата подписка на 2016 год!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
