Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
Журнал 'Цитокины и воспаление', 2016, № 2
|
Оригинальные статьи
|
Номер 2'2016
|
Полиморфизмы промоторов генов IL4, IL6, IL10 и TNFA взаимосвязаны с уровнем цитокинов в сыворотке крови у больных сахарным диабетом 2-го типа
В.В. Климонтов, Н.В. Тян, А.В. Шевченко, О.Н. Фазуллина, Н.Б. Орлов, В.И. Коненков
Цель исследования: определить взаимосвязи однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs) в промоторах генов IL4, IL6, IL10 и TNFA с уровнем цитокинов в сыворотке крови у больных сахарным диабетом (СД) 2-го типа. Материалы и методы. Обследованы 145 пациентов европеоидного происхождения. В сыворотке крови измеряли концентрации IL-4, IL-6, IL-10 и TNFα в сравнении с контролем (20 здоровых лиц). При помощи ПЦР в реальном времени исследованы семь SNPs: IL4: -590 C/Т (rs2243250), IL6: -174 G/C (rs1800795), IL10: -592 A/C (rs1800872) и -1082 A/G (rs1800896), TNFА: -238 A/G (rs361525), -308 G/A (rs1800629) и -863 C/A (rs1800630). Результаты. Уровень в сыворотке крови IL-6 был повышен, а уровень IL-4 понижен у больных СД в сравнении с контролем (р=0,04 и р=0,005, соответственно). Концентрации TNFa и IL-10 демонстрировали тенденцию к увеличению (р=0,07 и р=0,09, соответственно). Генотип IL6 (-174) GG был ассоциирован с более высоким уровнем IL-6 в сравнении с генотипами CC и CG (р=0,01 и р=0,004). Носители TNFA (-863) CC и CA генотипов имели достоверно более высокий уровень TNF.α по сравнению с носителями генотипа АА (р=0,04). Концентрация IL-10 оказалась ниже у больных с генотипом IL10 (-592) CC в сравнении с носителями генотипа АА (р=0,01). Уровень IL-10 был выше такового в контроле только у больных с генотипом IL10 (-592) AA (p=0,02). Наличие генотипа СС в позиции -590 гена IL4 былоассоциировано с меньшей концентрацией IL-4 (р=0,02). Остальные SNPs не показали влияния на уровень цитокинов. Заключение. Полиморфизмы промоторов генов IL4 (rs1800795), IL6 (rs1800795), IL10 (rs1800872) и TNFA (rs1800630) могут модифицировать интенсивность системного воспаления у больных СД 2-го типа. (Цитокины и воспаление. 2016. Т. 15. № 2. С. 186–191.)
Ключевые слова: сахарный диабет 2-го типа, однонуклеотидный полиморфизм, цитокины, воспаление.
Хроническое воспаление рассматривается как один из важнейших механизмов развития сахарного диабета (СД) и его сосудистых осложнений [1, 9]. Причины развития этого воспаления при СД не вполне ясны. Системное воспаление у больных СД 2-го типа связывают с повышением уровня и вариабельности гликемии, ожирением, дислипидемией и другими факторами [2, 7]. Важнейшей характеристикой системного воспаления является дисбаланс продукции провоспалительных и противовоспалительных цитокинов. В ряде исследований зафиксировано повышение концентрации провоспалительных цитокинов (IL-6, TNFα и др.) в сыворотке крови у больных СД 2-го типа [3, 10]. Закономерности изменений уровней противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-10) у этих больных мало изучены.
Известно, что базовый уровень продукции цитокинов во многом зависит от аллельных вариантов регуляторных участков их генов, является конституционно присущим и относительно стабильным у каждого человека на протяжении жизни. В промоторных участках генов цитокинов выявлены полиморфные локусы, аллельные варианты которых влияют на уровень экспрессии кодируемых белков [4].
Цель работы состояла в определении взаимосвязей между однонуклеотидными полиморфизмами (SNPs) в промоторах генов IL4, IL6, IL10 и TNFA и уровнями соответствующих цитокинов в сыворотке крови у больных СД 2-го типа.
Материалы и методы
В исследование были включены 145 больных СД 2-го типа, 112 женщин и 33 мужчины европеоидного происхождения, считающих себя и своих родителей русскими. Критериями исключения являлись: кетоацидоз в анамнезе и/или наличие других клинических или лабораторных признаков СД 1-го типа; признаки других специфических типов СД; злокачественные новообразования, аутоиммунные и хронические воспалительные заболевания в анамнезе; острые инфекционные и воспалительные заболевания в течение трех месяцев перед исследованием; ВИЧ-инфекция; дыхательная недостаточность; хроническая болезнь почек 4-й или 5-й стадии; лечение глюкокортикоидами, иммуносупрессантами, цитостатиками, нестероидными противовоспалительными средствами, тиазолидиндионами в течение трех месяцев перед исследованием.
Возраст обследованных варьировал от 43-х до 70 лет (медиана — 62 года), длительность заболевания с момента постановки диагноза — от одного года до 36 лет (медиана — 13 лет). В постменопаузе находились 106 женщин. Большинство обследованных имели ожирение (98 человек); избыточная масса тела зафиксирована у 40 пациентов. Сахароснижающая терапия включала: инсулины (n=123), метформин (n=80), препараты сульфонилмочевины (n=40), в большинстве случаев — в виде комбинаций (n=111). Уровень гликированного гемоглобина А1с (HbA1c) находился в пределах 5,3–12,1 % (медиана 8,1 %). Артериальная гипертензия диагностирована у всех обследованных, дислипидемия — у 133-х, ХБП 1–3 стадии — у 114, диабетическая ретинопатия — у 111, ишемическая болезнь сердца — у 56 пациентов, макроангиопатия нижних конечностей — у 27.
Исследование уровней цитокинов осуществляли в сыворотке крови, взятой из локтевой вены утром натощак. Концентрации IL-6 и TNFα измеряли методом проточной флуориметрии на двухлучевом лазерном автоматизированном анализаторе «Bio-Plex Protein Assay System» с использованием наборов реагентов фирмы «Bio-Rad Laboratories Inc.» (США). Определение концентраций IL-4 и IL-10 проводили иммуноферментным методом (ELISA) с помощью тест-систем фирмы «Bender Medsystems» (Австрия), с использованием планшетного ридера «BioRad 680» (США) и программного обеспечения «Zemfira». Результаты сопоставляли с контрольной группой из 20 человек (14 женщин и 6 мужчин) с нормальной массой тела, в возрасте от 40 до 67 лет, не имевших нарушений углеводного обмена и критериев исключения, указанных выше.
Исследование однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs) в промоторных регионах генов цитокинов: IL4:-590 C/Т (rs2243250), IL6: -174 G/C (rs1800795), IL10: -592 A/C (rs1800872) и -1082 A/G (rs1800896), TNFА: -238 A/G (rs361525), -308 G/A (rs1800629) и -863 C/A (rs1800630) проводили при помощи аллель-специфической полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на приборе «ДТ-96» (ООО «ДНК-Технология») с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green I (коммерческие тест-системы ООО «Научно-производственная фирма Литех», Россия).
Статистическая обработка проведена с использованием программы «Statistica 10» (StatSoft, Inc, 2011, CША). Учитывая, что распределение большинства изученных признаков было отличным от нормального, применяли методы непараметрической статистики. Межгрупповые различия оценивали с помощью критерия Манна — Уитни и ANOVA Краскела — Уоллиса. Взаимосвязь между признаками оценивали с помощью рангового корреляционного анализа. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди — Вайнберга. Достоверность различий частот распределения изучаемых признаков в альтернативных группах определяли по критерию χ2 с поправкой Йейтса на непрерывность и двустороннему варианту точного метода Фишера для четырехпольных таблиц. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали равным 0,05. Данные по уровню цитокинов представлены как медианы, 25–75 процентили.
Протокол исследования одобрен этическим комитетом института. Все пациенты давали письменное информированное согласие на участие в исследовании.
Результаты и обсуждение
Читайте статью целиком
в печатной версии журнала!
Содержание | Следующая статья | Предыдущая статья
|
Начата подписка на 2016 год!
Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.
|
![[О компании] Издательство 'Цитокины и воспаление' - Журнал 'Цитокины и Воспаление'](/images/Logo.gif){kind=logo}
